丹参素通过改善脑微循环障碍减轻血管性痴呆小鼠的神经元损伤

摘要

目的:
　　血管性痴呆(vascular dementia，VaD)是由于脑血管发生病理性改变引起的脑出血、脑梗塞及脑血流量灌注不足等因素诱导的脑功能障碍，目前对其发病机制尚不明确。临床研究表明血管性痴呆患者主要表现为脑血流量灌注不足，其中以海马、额叶皮质及顶叶皮质区域为中心。因此，慢性低灌注引起的脑部长期血流灌注不足被认为是血管性痴呆的发病机制之一。
　　丹参素(Danshensu，DSS≥主要由丹参中分离得到的主要药效成分，具有扩张冠状动脉、抑制血小板堆积、保护血管内皮细胞(vascular endothelial cell，VEC)、改善微循环障碍等药理活性。传统中药治疗痴呆有显著的疗效，其中丹参水煎剂通常单独或与其它中药配伍用于治疗痴呆等疾病。但是具体机制尚不清楚。本研究采用小鼠单侧颈总动脉永久性结扎复制脑慢性低灌注模型，应用DSS加以干预，观察DSS改善作用及探讨相应机制。
　　方法:
　　本实验采用小鼠单侧颈总动脉永久结扎法复制慢性低灌注模型。分为假手术组、阳性药组、丹参素组、模型组。通过Morris水迷宫实验评价各组小鼠学习和记忆能力，平衡木实验评价各组小鼠精细运动能力。尼氏染色法观察额叶皮质，顶叶皮质和海马区域神经元损伤情况，利用免疫组织化学法检测额叶皮质，顶叶皮质和海马区域微血管密度、血管内皮生长因子（vascular endothelial growth factor，VEGF）表达含量及软脑膜血管损伤情况。
　　结果:
　　1丹参素改善血管性痴呆小鼠的认知功能
　　Morris水迷宫实验评价各组小鼠学习和记忆能力:定位航行实验显示模型组小鼠与丹参素组小鼠找到隐蔽平台的时间（逃避潜伏期）存在显著差异，空间探索实验表明模型组小鼠在目标象限即原平台所在区域时间明显少于丹参素组。此外，在空间探索实验中，记录各组小鼠的游泳路径。结果显示模型组小鼠与假手术组小鼠相比较，其游泳路径杂乱无章，目的性差，且存在显著性差异。然而，通过给予丹参素后，游泳路径显得更加有序，目的明显，且游泳路径明显缩短，与假手术组相比无显著性差异。
　　2丹参素减轻血管性痴呆小鼠的精细运动功能
　　平衡木实验评价各组小鼠精细运动能力:小鼠滑足次数统计数据显示:模型组小鼠与丹参素组小鼠相比，模型组小鼠在平衡木实验中后足滑落次数明显多于丹参素组小鼠，且存在显著性差异;小鼠在平衡木上整体运动时间显示，模型组小鼠与丹参素组小鼠相比模型组小鼠在平衡木上所用时间要明显长于丹参素组小鼠，且存在显著差异;平衡木实验中，小鼠在起始区域时间（潜伏期）显示，模型组小鼠与丹参素组小鼠相比，模型组小鼠在起始区域（潜伏期）所用时间长于丹参素组小鼠，且存在显著性差异。
　　3丹参素降低血管性痴呆小鼠神经元损伤程度
　　Nissl染色法观察结果:模型组小鼠显示出顶叶皮质、前额叶皮质及海马CA1区神经元明显损伤及数量减少。然而，丹参素组小鼠与模型组小鼠相比较神经元损伤程度明显减轻。
　　4丹参素促进脑微血管新生
　　免疫组织化学法检测结果:模型组小鼠与假手术组小鼠相比，项叶皮质，前额叶皮质，海马CA1区域脑微血管数量增多。丹参素组小鼠脑内微血管密度(microvessel density，MVD)明显高于模型组小鼠。
　　5丹参素修复损伤的软脑膜血管
　　模型组小鼠与假手术组小鼠相比较显示，模型组小鼠软脑膜血管表现出明显损伤，同时，丹参素组小鼠软脑膜血管损伤程度明显减轻。
　　6丹参素增加血管性痴呆小鼠顶叶皮质、额叶皮质和海马神经元VEGF表达
　　模型组小鼠与假手术组小鼠相比较，顶叶皮质，前额叶皮质，海马区神经元表达VEGF含量提高。同时，丹参素组小鼠脑内神经元表达VEGF水平明显高于模型组小鼠。
　　结论:
　　1.丹参素能改善慢性低灌注小鼠的认知功能障碍及运动功能障碍。
　　2.丹参素明显减轻因慢性低灌注所致的神经元损伤。
　　3.丹参素能显著提高顶叶皮质、前额叶皮质和海马区域微血管密度。
　　4.丹参素能减轻慢性低灌注诱导的软脑膜血管损伤。
　　5.丹参素可以提高顶叶皮质、前额叶皮质和海马区VEGF的表达。
　　6.丹参素有助于改善慢性低灌注所引起的脑微循环障碍。

目录

缩略语表

摘要

引言

1．1 血管性痴呆的认识

1．2 造成血管性痴呆的危险因素

1．3 血管性痴呆的发病机制

2 丹参素的概述

2．1 丹参素的理化性质

2．2 丹参素的药理作用

1．1 实验动物

1．2 实验仪器

1．3 实验药品及主要试剂

2 实验方法

2．1 动物分组

2．2 模型的制备

2．3 模型复制成功评判标准

2．4 给药方法

2．5 标本取材及处理方法

2．6 脑组织石蜡包埋方法

2．7 行为学检测方法

2．8 组织学染色方法

3 统计学分析

4 结果

4．1 丹参素改善血管性痴呆小鼠的认知功能

4．2 丹参素减轻血管性痴呆小鼠的精细运动功能障碍

4．3 丹参素降低血管性痴呆小鼠神经元损伤程度

4．4 丹参素促进血管性痴呆小鼠脑微血管新生

4．5 丹参素修复损伤的软脑膜血管

4．6 丹参素增加血管性痴呆小鼠顶叶皮质、额叶皮质和海马神经元VEGF表达

5 讨论

5．1 丹参素的选择

5．2 模型复制方法及影响因素

5．3 丹参素对慢性低灌注模型干预效果分析

5．4 丹参素对慢性低灌注小鼠组织学影

5．5 丹参素对慢性低灌注小鼠CD34和VEl3F表达影响

结论

致谢

参考文献

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