酪丝缬肽(YSV)对肺癌的治疗作用及影响组蛋白乙酰化对细胞周期调控的机制研究

摘要

目的：
　　 研究三肽化合物酪丝缬肽（Tyroservatide，YSV）在体内外的抗肺癌作用，初步探讨其影响人肺癌细胞组蛋白乙酰化修饰，阻抑细胞周期进程，促进肿瘤细胞凋亡的可能机制。
　　 方法：
　　 1.应用MTS法和中空纤维测定法观察YSV对人肺癌NCI-H292细胞体外和体内生长的影响。
　　 2.应用Annexin V/PI双染法、DNA Ladder检测方法观察YSV对人肺癌NCI-H292细胞的凋亡诱导作用；并以流式细胞术观察YSV对人肺癌NCI-H292细胞的细胞周期的影响。
　　 3.应用实时荧光定量PCR和Western Blot方法观察YSV对人肺癌NCI-H292细胞周期蛋白依赖激酶抑制因子p21、p27的mRNA和蛋白表达的影响。
　　 4.应用Western Blot方法，观察YSV对人肺癌NCI-H292细胞组蛋白乙酰化H3、H4水平的影响；应用荧光检测技术和分光光度法分别观察YSV对人肺癌NCI-H292细胞的组蛋白去乙酰化酶（HDAC）和组蛋白乙酰化酶（HAT）活性的影响。
　　 5.应用染色质免疫沉淀（ChIP）方法，观察YSV对人肺癌NCI-H292细胞的细胞周期蛋白依赖激酶抑制因子p21、p27启动子相关组蛋白乙酰化程度的影响。
　　 结果：
　　 1.YSV在体外（0.2～3.2mg/ml）和体内（160～320μg/kg/d）均能够明显抑制人肺癌NCI-H292细胞的增殖（P<0.05）。
　　 2.YSV（0.8，1.6mg/ml）能够诱导人肺癌NCI-H292细胞凋亡，使凋亡细胞数明显增多，形成明显的DNA Ladder；能够阻抑人肺癌NCI-H292细胞的细胞周期进程，使S期细胞百分比明显增高，G2/M期百分比明显降低（P<0.05）。
　　 3.YSV能够上调人肺癌NCI-H292细胞的细胞周期蛋白依赖激酶抑制因子p21、p27的表达。
　　 4.YSV能够上调人肺癌NCI-H292细胞组蛋白H3和H4的乙酰化水平；抑制组蛋白去乙酰化酶的活性，对组蛋白乙酰化酶的活性未见明显影响。
　　 5.YSV能够诱导人肺癌NCI-H292细胞的细胞周期蛋白依赖激酶抑制因子p21、p27基因启动子区域组蛋白乙酰化水平增加，激活p21、p27基因的转录，诱导细胞周期阻滞。
　　 结论：
　　 YSV能够明显抑制人肺癌NCI-H292细胞的体内外增殖，阻抑肿瘤细胞的细胞周期，诱导凋亡。其作用机制是通过抑制人肺癌NCI-H292细胞组蛋白去乙酰化酶的活性，增加细胞周期蛋白依赖激酶抑制因子p21、p27基因启动子区域组蛋白H3、H4的乙酰化水平，促进p21、p27基因转录的活化和表达，进而影响细胞周期进程，使细胞阻滞于S期，抑制细胞增殖，诱导细胞调亡。