大鼠脑外伤后脑组织P-selectin、ICAM-1基因表达及EGB干预作用的实验研究

摘要

目的 颅脑损伤时，除外力直接作用造成脑损害外，同时发生一系列继发性病理改变。脑损伤后可引起脑微血管改变与微循环障碍，从而导致继发性脑组织缺血和脑代谢的变化，加重脑水肿。颅脑损伤后的炎性反应和脑微循环紊乱在这个过程中起重要作用。P-选择素(P-selectin)，又叫血小板α-颗粒膜蛋白(α—granule membrane protein-140，GMP-140)是血小板活化释放的特异性指标之一，可以反映体内血小板的活化程度及血栓形成倾向；细胞间粘附分子-1(intercellular adhesion molecule-l，ICAM-l)是机体重要的炎性介质之一，是内皮细胞和白细胞损害或激活的标志；银杏叶提取物(Extract of Ginkgo bi loba，EGB)是从银杏科植物银杏叶中分离纯化的提取物。本实验研究大鼠脑外伤后P-选择素和ICAM-1的表达变化及其与脑水肿等继发性脑损伤的关系，探讨颅脑损伤后脑水肿的分子机制以及EGB的干预作用，为临床治疗提供理论依据。 方法 第一部分参照Feeney's自由落体致伤法，制作大鼠大脑顶叶局灶皮质挫裂伤模型，将72只Spragtle-Dawley大鼠随机分为3组：A(标准对照组)、B(轻度损伤组)、C组(重度损伤组)，每组24只。分别于脑外伤后6小时、24小时、3天、7天随机各取标本6只，测定脑含水量，应用HE染色法观察各时段脑组织病理变化，采用免疫组化方法，应用P-选择素和细胞间粘附分子-1抗体检测伤后不同时段大鼠脑组织冰冻切片，检测P-选择素和细胞间粘附分子一1在脑组织的表达变化以及免疫阳性染色血管,并获取伤后不同时间段损伤灶周围的脑组织，采用实时反转录聚合酶链反应(RT-PCR)方法检测P-选择素mRNA和细胞间粘附分子-1mRNA的表达，采集数据，采用计算机图像分析系统和SPSS统计学软件包进行处理，P<0.05视为差异具有意义。 第二部分仍参照Feeney's自由落体致伤法，制作大鼠大脑顶叶局灶皮质挫裂伤模型，72只SD大鼠随机分为3组：A(标准对照组)，B(小剂量银杏叶提取物治疗组)、C组(大剂量银杏叶提取物治疗组)，每组24只，大鼠模型建立成功后，各治疗组大鼠术后每日分别腹腔注射EGB注射液50mg／kg、100mg／kg加生理盐水和地塞米松，对照组注射等量生理盐水和地塞米松。伤后6小时、24小时、3天、7天随机各取标本测定脑含水量，采用免疫组织化学，应用P-选择素和细胞间粘附分子-1抗体检测P-选择素及细胞间粘附分子-1在脑组织的表达变化以及免疫阳性染色血管，取伤后不同时间段损伤灶周围脑组织行实时反转录聚合酶链反应(RT-PCR)，检测P-选择素mRNA和细胞间粘附分子-1mRNA表达，采集数据，采用计算机图像分析系统和SPSS统计学软件包进行处理，与对照组比较，P<0.05视为差异具有意义 结果致伤后见损伤灶硬膜下出血，脑皮质挫裂，坏死和水肿，血栓形成，周围神经元变性，神经胶质细胞增生。脑损伤后脑皮层的含水量于致伤后6小时增加，24小时达到高峰，持续约3-5天，7天后接近正常。脑外伤后6小时，P-选择素和细胞间粘附分子-l的表达显著升高，于伤后24小时达到高峰，3天后逐渐降低，7天后接近正常。其中细胞间粘附分子-l高峰期出现较晚。脑损伤后损伤灶周围可见大量免疫阳性染色血管，粒细胞在损伤灶周围和侧脑室浸润。重伤组和轻伤组P-选择素和细胞间粘附分子-1阳性表达与对照组平均积分光密度值各时段均存在显著差异(P<0.05)。 银杏叶提取物治疗组大鼠损伤灶皮质脑含水量显著低于对照组(P<0.01)，且大剂量银杏叶提取物治疗组大鼠的脑含水量最少。银杏叶提取物治疗组在6小时以后亦出现P-选择素和细胞间粘附分子-l表达，但阳性细胞染色浅，数目较少。伤后24小时和3天，P-选择素和细胞间粘附分子-1表达阳性细胞数目明显减少。银杏叶提取物治疗组与对照组在皮质损伤边缘和侧脑室壁等均有P-选择素和细胞间粘附分子-1阳性表达，而且平均积分光密度值各时段均亦存在显著差异(P<0.01)。 结论大鼠脑损伤后脑组织内P-选择素和细胞间粘附分子-1的表达及粒细胞浸润显著升高，其变化规律与脑外伤后脑水肿等继发性损伤的发展规律相吻合。P-选择素和细胞间粘附分子-1表达的增加可能参与了脑外伤后的继发性损伤。银杏叶提取物可以减少P-选择素和细胞间粘附分子-1表达及中性粒细胞浸润，明显减轻神经细胞的损伤，其对神经元的保护作用可能与抑制P-选择素和细胞间粘附分子-l的表达有关，而且大剂量组(100mg／kg)作用明显，小剂量组(50mg／kg)作用稍差。银杏叶提取物可以试用于治疗脑外伤，改善微循环，减轻炎性反应，促进神经功能恢复。

目录

前言

第一部分大鼠脑外伤后脑组织P-selectin和ICAM-1基因表达 材料和方法

第一部分大鼠脑外伤后脑组织P-selectin和ICAM-1基因表达 结果

第一部分大鼠脑外伤后脑组织P-selectin和ICAM-1基因表达 讨论

第一部分大鼠脑外伤后脑组织P-selectin和ICAM-1基因表达 小结

第一部分大鼠脑外伤后脑组织P-selectin和ICAM-1基因表达 参考文献

第二部分EGB对大鼠脑外伤后脑组织P-selectin和ICAM-1基因表达的影响 材料和方法

第二部分EGB对大鼠脑外伤后脑组织P-selectin和ICAM-1基因表达的影响 结果

第二部分EGB对大鼠脑外伤后脑组织P-selectin和ICAM-1基因表达的影响 讨论

第二部分EGB对大鼠脑外伤后脑组织P-selectin和ICAM-1基因表达的影响 小结

第二部分EGB对大鼠脑外伤后脑组织P-selectin和ICAM-1基因表达的影响 参考文献

全文总结

综述

中英文缩略语表

致谢

声明