IFIT4在系统性红斑狼疮中的表达及其在单核细胞分化中的功能研究

摘要

系统性红斑狼疮(SLE)患者体内免疫系统功能紊乱造成多脏器损伤，患者的健康和寿命受到严重威胁。由于发病机制不清，尚未有根治性药物治疗。为探寻SLE发病机制，我们利用寡核苷酸基因芯片，筛选到一组IFN诱导表达蛋白(IFN-I induciable protein)在SLE外周血白细胞高表达，其中包括一个表达和功能未知的新基因：IFIT4(Interferon-induced Drotein with tetratricopeptide repeats 4)。提示这组基因可能与SLE发病相关。本实验拟探讨IFIT4的表达特性和生物学功能及其在SLE中免疫紊乱致病机制中的作用。 目的：①探讨IFIT4与SLE病情、临床表现、自身抗体等指标的相关性。②探讨IFIT4的组织、细胞分布、亚细胞定位及干扰素(IFN)-Q对其表达的影响。③探讨IFIT4在单核细胞向树突细胞分化过程中的生物学功能。 方法：①利用半定量qRT-PCR检测107例SLE患者和45例正常人外周血单个核细胞(PBMC)中IFIT4 mRNA表达差异，并且与临床各项检查指标进行相关性分析；Western-blot检测各25例SLE患者和正常人PBMC中IFIT4蛋白的表达差异；免疫荧光双染、共聚焦显微镜观察SLE患者肾脏中各免疫细胞中IFIT4的表达差异。②利用反转录一聚合酶链反应(RT—PCR)检测IFIT4 mRNA在15种组织及4种免疫细胞中的表达；构建和转染GFP一IFIT4融合质粒入单核细胞，共聚焦显微镜观察IFT4亚细胞定位；最后用western-blot、qRT—PCR检测工FN—α和CpG—A刺激正常人外周血单个核细胞(PBMC)前后IFIT4、statl等的表达差异。③将IFIT4融和质粒电转染到单核细胞系细胞(THP一1)中使其过表达，在GM—CSF／IL一4／TNF—α刺激下诱导DC分化的过程中，分别用显微镜、FACs、。H掺入试验、ELISA检测空质粒对照组和IFIT4融合质粒组诱导分化的DC样细胞表型的差异。ELISA法检测经IFIT4过表达并被诱导分化的细胞刺激T细胞分泌IFN—γ和IL一4的水平差异。 结果：①与正常人相比，SLE患者PBMC中IFIT4mRNA和蛋白质明显高表达，IFIT4的表达与自身抗体如抗核抗体(ANA)，抗ds—DNA，抗sM抗体相关，但与临床表现，如面部红斑、溃疡、肾炎、补体下降不相关；IFIT4在狼疮肾组织浸润的炎性细胞中高表达。②IFlT4 mRNA主要表达在免疫相关组织(如脾、淋巴细胞、淋巴结、骨髓)和肺脏中及在CDl9<'+>，CD8<'+>，CDl4<'+>细胞；IFIT4蛋白定位于细胞浆，经干扰素刺激后没有转移到核内的运动；其表达受IFN—α调控，CpG—A不直接参与IFIT4表达调控。③IFIT4过表达细胞组中CD80、CD86、CD40、HLA—DR增高程度和CDl4、CDllc下调幅度、抗原递呈能力和分泌IL—12的水平均高于对照组，提示IFIT4参与促进DC分化的功能。诱导的DC样细胞刺激T细胞产生更多的IFN—γ，提示促进Thl细胞的形成。 结论：①IFIT4在SLE病人高表达且与自身抗体相关，提示IFIT4与SLE免疫紊乱和发病机制明显相关。②工FIT4主要表达于免疫组织和细胞，且受工FN-α调节，提示IFIT4可能作为IFN-α下游的效应分子发挥工FN的某些生物学功能，参与免疫系统调控机制。③IFIT4具有促进单核细胞向DC分化的功能，提示IFIT4可能通过其影响细胞分化的作用在SLE的发病过程和免疫紊乱机制中发挥潜在致病作用。

目录

摘要

缩略语中英文对照

前言

第一章干扰素诱导表达的基因IFIT4在系统性红斑狼疮（SLE）的表达及临床相关性分析

第二部分IFIT4(interferon induced protein with trtratricopeptide repeats 4)的表达特性、亚细胞定位、及LFN对其表达的影响

第三部分IFIT4(interferon induced protein with trtratricopeptide repeats 4)促进单核细胞分化

结论

参考文献

致谢

发表和待发表文章目录

综述IFN-I及其诱导蛋白IFIT4在系统性红斑狼疮中的研究进展