藻蓝蛋白酶解条件优化及产物抑制肥胖相关酶活性的研究

摘要

本文首先以蛋白含量和氨基酸含量为指标,筛选螺旋藻藻株,其次利用反复冻融结合超声波法破碎藻丝体细胞,采用盐析法制备藻蓝蛋白,最后通过水解条件优化确定藻蓝蛋白的酶解工艺,进而研究酶解产物抑制肥胖相关酶的活性,为螺旋藻及其藻蓝蛋白在医疗、保健领域的应用提供理论依据。主要研究结果如下:
　　1、螺旋藻藻株的筛选
　　在9000lx光照强度,光暗比12:12h,昼夜温度分别为30℃和28℃的培养条件下,螺旋藻藻株40SY的生长较快,具有较高的蛋白含量(58.62％)和氨基酸含量(总氨基酸50.21mg/100mg、必需氨基酸相对含量38.69%),并且与已报道的抗肥胖肽作比较,该螺旋藻中的精氨酸(4.09mg/100mg,相对含量8.14%)、组氨酸(0.91mg/100mg,相对含量1.81%)、脯氨酸(1.34mg/100mg,相对含量2.66%)和亮氨酸(4.64mg/100mg,相对含量9.23%)含量均为最高。
　　2、藻蓝蛋白抗肥胖酶解产物的制备
　　以胰脂肪酶抑制活性为指标,评价中性蛋白酶、碱性蛋白酶、木瓜蛋白酶、胰蛋白酶酶解藻蓝蛋白的效果,选用效果最明显(43.89%)的中性蛋白酶为试验用酶,经过单因素试验和响应面分析确定了中性蛋白酶水解藻蓝蛋白制备具有抑制胰脂肪酶和α-淀粉酶活性的酶解产物的最佳条件,即酶解温度47℃、pH7、酶解4.5h、加酶量118U/ml。此时该酶解产物的胰脂肪酶抑制率和α-淀粉酶抑制率分别为53.88%、36.21%。
　　3、藻蓝蛋白酶解产物抑制肥胖相关酶活性的测定
　　藻蓝蛋白酶解产物对胰脂肪酶和α-淀粉酶具有一定的抑制作用,且有一定剂量依赖的关系,即随着酶解产物浓度的增加抑制效率逐步增强。当浓度达到10mg/mL时,胰脂肪酶抑制率为62.15%、α-淀粉酶抑制率为46.89%。同时,酶解产物能降低胆固醇胶束的溶解度,具有一定的剂量关系,当浓度上升到15mg/mL时,其对体外模拟人体胆汁胶束中胆固醇溶解度的抑制率达到57.09%。

目录

封面

声明

中文摘要

英文摘要

目录

第一章 前言

1.1 藻蓝蛋白

1.2 藻蓝蛋白酶解产物研究现状

1.3 肥胖的研究进展

1.4 选题意义及技术路线

第二章 螺旋藻藻株的筛选

2.1 材料与方法

2.2 结果与讨论

2.3 本章小结

第三章 藻蓝蛋白抗肥胖酶解产物的制备

3.1 材料与方法

3.2 结果与讨论

3.3 本章小结

第四章 藻蓝蛋白酶解产物抑制肥胖相关酶活性的测定

4.1 材料与方法

4.2 结果与讨论

4.3 本章小结

第五章 结语

5.1 实验结论

5.2 创新点

5.3 不足及进一步工作的设想

参考文献

参加科研情况说明

附录

致谢