小鼠LIGHT真核表达载体的构建及其与乙肝核酸疫苗的联合免疫研究

摘要

感染HBV能导致急性、慢性肝炎，与肝硬化及肝细胞癌有密切关系。目前，控制HBV感染的有效方法是接种乙肝疫苗。基因疫苗的兴起和发展为乙型肝炎病毒感染的防治提供了新的途径。基因疫苗可诱导机体产生细胞及体液免疫反应，特别是诱导细胞免疫反应的能力优于蛋白、多肽类疫苗，在乙型肝炎病毒的清除方面具有较好的应用前景，更适应于慢性病毒感染的预防与治疗。 核酸疫苗的免疫效果在不同动物个体中差异较大，某些肿瘤及病毒的T、B细胞表位抗原性弱，难以诱导有效的T、B细胞免疫应答，提高核酸疫苗的免疫效果己成为研究热点。基因佐剂是将编码某些细胞因子及T、B细胞表面共刺激分子等的基因与目的基因克隆于同一载体或不同载体共同免疫动物，其表达的相应蛋白可起到佐剂的作用，从而大大增强T、B细胞的免疫应答水平。 LIGHT是TNF配体家族的成员，可以共刺激T细胞增殖。HVEM是LIGHT介导T细胞活化的受体，LIGHT通过与HVEM结合发挥共刺激作用，参与T细胞增殖和细胞因子的产生。越来越多的证据表明LIGHT与其受体的相互作用可作为控制细胞免疫应答的潜在目标。 本研究对小鼠LIGHT作为乙肝核酸疫苗的基因佐剂方面进行了初步研究。在克隆小鼠LIGHT基因的基础上，构建其胞外段基因的原核表达载体，在大肠杆菌中进行诱导表达并对其表达条件进行了初步的探索；构建LIGHT全长基因的真核表达质粒并在体外转染细胞，检测结果表明真核表达质粒中的LIGHT基因可在哺乳动物细胞中进行表达；混合淋巴细胞反应中LIGHT转染的树突状细胞可显著增强同种异体T淋巴细胞增殖；将LIGHT真核表达质粒与乙肝核酸疫苗质粒联合免疫Balb/c小鼠，细胞免疫与体液免疫功能检测结果表明LIGHT可以增强小鼠体内的特异性免疫应答，从而发挥免疫佐剂的作用。

目录

文摘

英文文摘

声明

前 言

实验一小鼠LIGHT基因的克隆及其胞外段在大肠杆菌中的表达

材料

方法

结果

讨论

实验二LIGHT在真核细胞中的表达及功能检测

材料

方法

结果

讨论

实验三乙肝核酸疫苗与LIGHT真核表达质粒的联合免疫研究

材料

方法

结果

讨论

参考文献

结 论

附 录：攻读硕士学位期间发表的论文

致谢

综述：LIGHT及其不同受体结合后的生物学功能研究进展