LIF对人滋养细胞原癌基因c-jun、c-fos及基质金属蛋白酶MMP-2、MMP-9表达调节的研究

摘要

胚胎着床是女性生殖过程的重要环节，受到多种因素调控，其详细机理还不清楚。白血病抑制因子(1eukemiainhibitoryfactor，LIF)是胚胎着床过程的必需因子，母体子宫缺乏LIF表达会引起胚胎着床失败，但LIF调节着床的机理有待深入研究。本课题目的是通过研究LIF对体外培养的人孕早期滋养细胞c—jun、c-fos的表达以及LIF对基质金属蛋白酶MMP一2、MMP一9和TIMP-1表达的调节，探讨LIF调节人胚胎植入过程的作用机理。 第一部分LIF对人早孕滋养细胞原癌基因c—jun、c-fos表达的调节 目的本实验旨在观察LIF对人早孕滋养细胞原癌基因c—jun、c—fos转录水平的调节。 方法应用硅化聚乙酰胺吡咯烷酮(percoll)密度梯度离心和差速贴壁分离法，分离早孕期人细胞滋养细胞；分别采用1ng/ml、long／m1、lOOng/ml浓度的LIF作用于体外培养的细胞，于O．肌、1h、4h收集细胞，提取总RNA，用RT一PCR方法检测c—jun、c—fosmRNA的表达。 结果在正常的人早孕滋养细胞中c—jun、c—fos有一定水平的表达。LIF作用0．5h后，实验组c—jun、c-fos的表达与对照组无显著性差异(P>O．05)，但相关分析提示二者的表达水平随LIF剂量的增加而增加，呈一定的剂量依赖关系(c—jun，r=O．637：c—fos，r=O．688)；LIF作用1h后，实验组c—jun、c—fos的表达与对照组相比，差异极显著(PO．05)。 结论LIF在一定的时间和剂量范围内对体外培养的滋养细胞原癌基因c—jun和一fos的表达具有促进作用，而且其调节呈剂量依赖关系。LIF对c—jun和一fos的这种限制性调节可能对滋养细胞的早期分化发育和节制性入侵具有重要作用。 第二部分LIF对人早孕滋养细胞l~P-2、I~!P-9和TIMP-1表达和分泌的调节 目的本实验旨在观察LIF对人早孕滋养细胞MMP一2、MMP一9和TIMP一1转录水平的调节和蛋白分泌的影响。 方法分别采用lng／ml、long／ml、lOOng/m1浓度的LIF作用于体外培养的细胞滋养细胞，于2h、4h、12h收集细胞，提取总RNA，用RT—PCR方法检测MMP一2、MMP一9和TIMP—lmRNA的表达；用明胶酶谱法检测LIF对滋养细胞基质金属蛋白酶分泌的影响。 结果LIF对人早孕滋养细胞MMP一2和TIMP—lmRNA的表达无明显作用。LIF作用2h后对滋养细胞MMP一9mRNA表达和蛋白分泌无明显作用；作用4h后，实验组MMP一9的基因表达水平明显上升，实验组和对照组差异极显著(P

目录

前言

试剂和仪器

细胞滋养的分离、纯化

第一部分LIF对人早孕滋养细胞原癌基因c-jun、c-fos表达的调节一、LIF对人早孕滋养细胞原癌基因c-fos mRNA表达的影响

第一部分LIF对人早孕滋养细胞原癌基因c-jun、c-fos表达的调节二、LIF对人早孕滋养细胞原癌基因c-jun mRNA表达的影响

第二部分LIF对人早孕滋养细胞MMP-2、MMP-9和TIMP-1表达和分泌的调节一、LIF对人早孕滋养细胞MMP-2、MMP-9和TIMP-1mRNA表达的调节

第二部分LIF对人早孕滋养细胞MMP-9、MMP-2蛋白分泌的影响

全文小结

参考文献

致谢

血白病抑制因子调节胚胎着床机理的研究

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