散发性结直肠癌的β-Catenin基因突变及表达和单细胞拉曼光谱研究

摘要

目的：(1)观察β-Catenin基因在散发性结直肠癌(SCRC)中胞浆胞核异常表达特征及突变发生率并探讨其I临床病理相关性；(2)检测SCRC标本的微卫星不稳定(MSI)状态，分析其与B-Catenin基因突变的关系；(3)检测SCRC组织及癌旁正常粘膜中β-CateninmRNA的含量，探讨其与SCRC中的β-Catenin蛋白异常表达以及临床病理学指标间的关系；(4)检测SCRC单细胞的拉曼光谱，以便建立区分癌细胞和正常细胞的诊断识别模型并分析生化改变。方法：(D用免疫组织化学EnVision二步法检测了90例SCRC和22例散发性结直肠腺瘤标本的β-Catenin基因在胞浆胞核中的异常表达。(2)以PCR扩增和直接测序检测了上述标本中β-Catenin基因第3外显子突变。(3)用PCR扩增和毛细管电泳检测Bat25和Bat26两个微卫星位点。(4)用Taq№n实时荧光定量PCR方法检测了8l例SCRC组织和28例癌旁正常粘膜组织的β-CateninmRNA含量。(5)应用光镊拉曼光谱技术(LTRS)检测10例SCRC的单细胞和正常粘膜上皮单细胞的拉曼光谱，经主元分析和逻辑回归分析建立诊断识别模型。结果：(1)正常结直肠粘膜中β-Catenin表达定位于细胞膜上，未见胞浆胞核的异常表达。散发性结直肠腺瘤和腺癌组织出现胞浆和胞核的异常表达，膜表达有不同程度的降低。在SCRC中β-Catenin的胞浆和胞核表达率(分别为88．9％和41.1％)显著高于散发性结直肠腺瘤(分别为59．1％和18．2％)(P<0．05)。SCRC的B-Catenin异常胞浆表达与肿瘤生长方式、分化程度相关，阳性表达率在溃疡型和浸润型生长、高中分化腺癌分别高于隆起型生长、低分化腺癌(P<0.05)。SCRC的B-Catenin核表达率在浸润型和溃疡型生长(50。0％)高于在隆起型生长(26。5％)(P<0。05)。核表达多为灶性分布，主要在肿瘤浸润前沿呈阳性表达。(2)90例SCRC标本中仅有1例在β-Catenin第3外显子发生点突变，为杂合性突变，即41密码子ACC→GCC，苏氨酸变成丙氨酸，突变率约1％。22例散发性腺瘤未发现第3外显子突变。(3)90例SCRC标本中有8例表现高度微卫星不稳定(MSI—m，发生率为9％(8/90)，其中一例为β-Catenin突变，而微卫星稳定(MSS)病例中未检测到突变。(4)在散发性结直肠癌组织中β-CateninmR№含量(2.5267±2.2839)低于癌旁正常粘膜组织中的含量(5.0029±3.3264)，差别有显著性意义。淋巴结转移组的B-CateninmRNA含量(1.8266±1.2883)低于淋巴结无转移组(3.3592±2.8805)，P

目录

引言

第一部分散发性结直肠癌中β-Catenin基因突变及表达研究

第二部分单细胞光镊拉曼光谱分析技术在散发性结直肠癌中的诊断应用研究

总结

附录：英文缩略语

攻读博士学位期间发表及待发表的论文题录

文献综述(一)β-Catenin基因突变及表达与结直肠癌

文献综述(二)拉曼光谱分析技术在肿瘤研究中的应用

致谢

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