Lewis y抗原促进卵巢癌细胞RMG-I血管内皮生长因子受体的表达

摘要

目的：卵巢癌是妇科死亡率最高的恶性肿瘤，它的发生机制一直是妇科肿瘤基础与临床研究探索的重点。本研究通过比较转染1，2—FT前后RMG—I细胞表面VEGF受体的变化，探讨Lewisy在卵巢癌恶性进展中的作用，为卵巢癌发生、发展机制的研究提供新的途径。 方法：①选取10只4—6周龄健康雌性裸鼠，体重(20.4±0.6)g，随机分成两组，实验组与对照组裸鼠背部皮下分别注射RMG—I—H及RMG—I细胞悬液0.3 ml，在SPF条件下饲养裸鼠，五周后处死，取出皮下瘤块，制备成石蜡块。上述裸鼠皮下移植瘤经病理检查证实为低分化卵巢透明细胞癌。②卵巢癌RMG—I和RMG—I—H裸鼠皮下移植瘤石蜡块标本，连续切片，厚度为4μm，进行微波抗原修复。③取指数生长期的卵巢癌RMG—I和RMG—I—H细胞行总RNA的提取(Trizol法)，RT-PCR参照TAKARA试剂盒说明书操作。PCR产物经2％琼脂糖凝胶电泳，EB染色后拍照。试验中分别设立各样本的β—actin作为对照。拍照并以图像分析软件Quantiscan分析处理，以各自内参照β—actin表达量为基准计算各样本的相对含量。④所有数据均以SPSS13.0软件进行分析，采用t检验比较Flt—1、KDR在卵巢癌细胞系RMG—I—H和RMG—I中表达的差异。所有数据均以(x±s)表示，P<0.05似为差异有统计学意义。 结果：⑴免疫细胞化学染色观察发现，Flt—1及KDR均弥散分布于胞浆和胞膜。Flt—1在RMG—I—H细胞中染色阳性颗粒呈棕黄色或淡黄色，其积分光密度为21.000±1.255，而在RMG—I中染色阳性颗粒呈淡黄色，积分光密度值为17.868±1.818，两种细胞中染色强度无明显差异(P=0.411)。KDR在RMG—I—H中染色阳性颗粒呈棕黄色或淡黄色，其积分光密度为24.245±2.168，而在RMG—I中染色强度减弱，阳性颗粒呈淡黄色，其积分光密度值为14.469±1.0443，KDR在RMG—I—H中染色强度明显高于RMG—I。⑵免疫组织化学染色结果发现，Flt—1及KDR在裸鼠皮下移植瘤组织中的表达情况与细胞中相似，两者均弥散分布于胞浆和胞膜。Flt—1在RMG—I—H移植瘤组织中染色阳性颗粒呈棕黄色或淡黄色，其积分光密度值为45.540±2.373，在RMG—I移植瘤组织中染色阳性颗粒呈淡黄色，其积分光密度值为42.009±2.905，两种裸鼠皮下移植瘤组织染色强度无差异(P=0.270)。KDR在RMG—I—H移植瘤组织中染色阳性颗粒呈棕黄色或淡黄色，其积分光密度值为71.519±2.558，而在RMG—I移植瘤组织中染色阳性颗粒呈淡黄色，其积分光密度值为45.977±1.879，KDR在RMG—I—H移植瘤组织中染色强度明显高于RMG—I(P=0.001)。⑶在细胞系RMG—I—H和RMG—I中，Flt—1 mRNA的相对表达含量分别为0.896±0.042和0.788±0.100，两者间无差异(P=0.120)；而KDR mRNA的相对表达含量分别为0.680±0.030和0.463±0.018，RMG—I—H中KDR mRNA的相对表达含量明显高于RMG—I(P=0.003)。与蛋白的表达一致，转染后细胞中KDR在基因水平的表达增高，而Flt—1的表达没有显著变化。 结论：Lewisy抗原增加引起卵巢癌细胞系RMG—I KDR受体表达增高，其变化在基因水平调节。Lewisy抗原可能通过VEGF自分泌和旁分泌途径介导卵巢癌的增殖、侵袭、转移和耐药等生物学行为。

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综述 岩藻糖基与细胞表面部分受体关系的研究进展

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