牛γ-干扰素和人溶菌酶共表达载体的构建和表达产物的纯化

摘要

本文进行了如下研究： 一、牛γ-干扰素和人溶菌酶共表达载体的构建及表达分别将牛γ干扰素基因(BoIFN-γ)和内部核糖体位点(IRES)从pFAST-IFN载体和pIRES载体质粒上双酶切回收，亚克隆到pFASTBac-hLyz载体中，构建转移载体pFASTBAC1-IFN-IRES-hLyz；转移载体质粒转化DH10Bac感受态大肠杆菌，通过位点特异性转座作用将牛γ干扰素基因(BoIFN-γ)和人溶菌酶基因(hLyz)整合到Bacmid穿梭载体中。在含庆大霉素、四环素、卡那霉素、IPTG和X-gal的LB平板上筛选发生转座的白色菌落，提取DNA，获得重组穿梭载体Bacmid-IFN-IRS-hLyz；将重组穿梭载体Bacmid-IFN-IRS-hLyz用脂质体介导转染Sf9昆虫细胞，产生有感染力的重组杆状病毒；PCR扩增结果证实BoIFN-γ和hLyz基因重组到杆状病毒基因组中；表达产物中含有牛γ-干扰素和人溶菌酶重组蛋白。 二、牛γ-干扰素真核表达产物的纯化 分别以不同MOI的重组病毒感染Sf9细胞，并在感染后不同时间段收集上清，进行表达产物的活性检测，选择最佳的优化条件进行重组蛋白的大量生产。将重组牛γ干扰素感状病毒感染Sf9细胞，5天后收获细胞上清，透析浓缩后，用羟基磷灰石层析和疏水层析过柱，获得初步纯化的牛γ干扰素重组蛋白。

目录

文摘

英文文摘

论文说明：符号说明

声明

文献综述一：IFN-γ、IRES和hLyz研究进展

文献综述二：多基因共表达载体的构建

文献综述三：蛋白质纯化方法研究进展

研究内容一：BoIFN-γ和hLYZ共表达载体的构建及其表达

1材料与方法

2结果

3讨论

研究内容二：BoIFN-γ真核表达产物的纯化

1材料和方法

2结果

3讨论

参考文献

成果小结

致谢