人多发性骨髓瘤患者来源的DCs的体外诱导及生物学特性研究

摘要

多发性骨髓瘤(MM)为浆细胞恶性增殖性疾病，其特征是浆细胞合成分泌单克隆的独特型(Id)。迄今，应用常规化疗(马法兰、强的松等)，MM患者中位生存期仍然徘徊在3年左右。大剂量化疗结合自体造血干细胞移植可延长患者的中位生存期，但仍远未达到治愈。 树突状细胞(DCs)是体内已知的功能最强的抗原提呈细胞(APC)，有文献报道，采用MM患者单核细胞来源的DCs负载Id后的免疫治疗方案，患者出现显著的抗肿瘤免疫应答。MM患者经过传统治疗后易留下微小残留肿瘤，此时使用以DCs及DCs激发的细胞毒性T细胞(CTL)为物质基础的免疫治疗有助延长患者生存期，并延迟复发，值得深入探讨。 目的本研究在体外从多发性骨髓瘤患者外周血单核细胞诱导DCs，并对其生物学特性进行初步研究，旨在为以DCs为物质基础的MM的免疫治疗提供实验依据。 方法从MM患者和正常人外周血中分离获得单核细胞，在含GM-CSF和IL-4的培养基中培养，在培养的第7d，以诱导凋亡的多发性骨髓瘤细胞XG-2进行抗原负载，24h后加入TNF-a继续诱导2～3d，获得具有典型树突状形态的MM患者来源和正常人来源的DCs。进而通过免疫荧光标记、流式细胞仪分析、FITC-Dextran吞噬实验、酶联免疫吸附试验(ELISA)、混合淋巴细胞反应(MLR)和MTT法等方法比较MM患者和健康志愿者外周血单核细胞来源的DCs的形态、增殖、表型及功能差异。 结果MM患者和正常人来源的DCs皆具有典型的形态特征，两者的生长曲线亦无明显差异。同时患者和正常人来源的DCs细胞均高表达CDlα、CD80、CD86和HLA-DR等树突状细胞的相关抗原和共刺激分子。但MM患者来源的DCs在培养早期即高表达、且持续高表达PD-L1，而PD-L2的表达则较正常人低(p<0．05)；患者来源的DCs自分泌高水平的IL．10，体外激发自体T细胞增殖的能力较正常人下降(p<0．05)；MTT法测定DCs激发的T细胞的细胞毒结果显示，经MM患者源DCs激发后的自体T细胞对MM细胞的特异性杀伤作用明显高于IL-2活化的T细胞对MM细胞的非特异性杀伤作用，但比正常人来源的DCs活化的T细胞对相应肿瘤细胞的体外杀伤能力低(p<0．05)。 结论从MM患者外周血单核细胞能诱导培养出形态典型的DCs，可以有效地提呈抗原并在体外激活T细胞增殖，发挥对MM细胞的非特异性杀伤作用，但MM患者来源的DCs由于自分泌高水平的IL．10和高表达PD-L1而影响其功能的行使。

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材料和方法

结果

讨论

参考文献

全文小结和展望

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本研究获得的基金资助

多发性骨髓瘤的免疫治疗研究进展

致谢