日本血吸虫生殖细胞和体细胞遗传特性的研究

摘要

目的：制备日本血吸虫(Schistosome japonicum)雄虫生殖细胞减数分裂(meiotic mitosis)时期的染色体(chromosome)和体细胞有丝分裂时期的染色体，探索血吸虫染色体C带和G带制备方法，分析其染色体核型和C带、G带带型特征；在扫描电镜下观察染色体的形态特征，进一步丰富对日本血吸虫染色体结构组成的认识，为深入研究日本血吸虫染色体和血吸虫基因组工程提供基础。 方法：向感染日本血吸虫尾蚴的小鼠腹腔注射秋水仙素，4-6h小时后处死小鼠，收集成虫，快速切下多条雄虫睾丸部分，经剪碎、胰酶消化、低渗、固定后，气干法制片，Giemsa染色，显微镜下观察、拍照，进行染色体核型分析；按上述方法制备日本血吸虫体细胞染色体，部分染色体标本Giemsa染色、观察、拍照，部分染色体标本室温放置后依次用HCl溶液、饱和氢氧化钡溶液、2×SSC溶液处理，Giemsa染色，观察C带；另一部分染色体标本用低浓度胰酶溶液处理，Giemsa染色，观察G带；将分裂好、分散好的日本血吸虫染色体标本在显微镜下做好标记，置于离子溅射仪中喷金，日立8-4700型扫描电镜观察，摄影。 结果：(1)日本血吸虫生殖细胞减数分裂染色体数目为8条，根据Levan标准，日本血吸虫生殖细胞染色体可分为3组加上性染色体，其中m组中部着丝粒染色体为2对，Sm组亚中部着丝粒染色体为3对，St组亚端部着丝粒染色体为2对，性染色体为1对，核型公式为n=2m+3Sin+2St+性染色体。 (2)日本血吸虫体细胞有丝分裂染色体数目为16条，核型公式为2n=4m+6Sm+4St+2性染色体，与生殖细胞染色体核型公式相符。C带特征为：每条染色体都有着丝粒带，除此之外，No．1号长、短臂上各有一条末端带：No．2号短臂上有一条中间带；No．3号长、短臂上各有一条中间带；No．4号长臂上有两条中间带；No．5号长臂上有一条中间带；No．6号长臂上有一条末端带；No．7号短臂上有一条中间带；Z染色体长臂上有一条中间带；W染色体短臂上一条中间带，长臂上有两条中间带，其核型公式为2n=，5CI++4CI++3CI+2CT+2CT+。G带特征为：No．1号染色体长、短臂上各有1条显带；No．2号染色体短臂1条显带，长臂2条显带：No．3~4号染色体短臂1条显带，长臂4条显带；No．5～7号染色体辐壁1条显带，长臂2条显带；No.8号染色体短臂2条显带，长臂4条显带。 (3)血吸虫染色体标本直接用离子溅射仪镀膜后扫描电镜观察，不用胰酶处理的染色体表面光滑，未见螺旋状结构，而用胰酶处理过的染色体标本，表面可见螺旋状结构。 结论：本研究方法可成功制备日本血吸虫生殖细胞减数分裂各时期染色体和体细胞有丝分裂各时期的染色体，获得了较理想的染色体核型图像和C带、G带带型；染色体标本直接喷金法可以清楚的观察到染色体结构。

目录

文摘

英文文摘

论文说明:缩写词表

声明

引言

第一部分日本血吸虫精细胞减数分裂核型及G带研究

第二部分日本血吸虫体细胞有丝分裂核型及C带、G带制备

第三部分日本血吸虫染色体扫描电镜观察

小结

参考文献

硕士在读期间公开发表的论文及论著

综述 日本血吸虫种群的遗传标志研究进展

致谢