HSP90抑制剂17-AAG对结肠癌HT-29细胞增殖和凋亡的影响

摘要

目的:研究热休克蛋白90抑制剂17-烯丙胺基-17-脱甲氧基格尔德霉素(17-AAG)对结肠癌HT-29细胞增殖和凋亡的影响，并对其机制进行初步探讨。 方法:以不同浓度的17-AAG作用于对数生长期的结肠癌HT-29细胞，应用MTT比色法检测其吸光度(OD)值，计算细胞生长抑制率；用DAPI染色在荧光显微镜下观察细胞凋亡形态学变化；采用流式细胞仪分析各组细胞的细胞周期变化；以Annexin-FIVC和PI双染法检测各组细胞的凋亡率变化；免疫组化检测结肠癌HT-29细胞中血管内皮生长因子(VEGF)、生存素(Survivin)蛋白表达的变化；逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)检测细胞中VEGFmRNA和SurvivinmRNA的表达水平。 结果:MTT法显示17-AAG对结肠癌HT-29细胞的生长增殖有抑制作用，呈时间、剂量依赖性(P<0.05)。荧光显微镜观察到药物处理组细胞出现细胞凋亡现象。流式细胞仪细胞周期分析显示，处理组HT-29细胞呈G2/M期阻滞，随着药物浓度的加大，处于G2/M期的细胞比例上升，G1/G0期的细胞比例下降。Annexin-FIVC和PI双染检测结果显示17-AAG浓度为50、100、200nmol/L的细胞凋亡率分别为15.3％、26.5％、41.2％，与对照组相比有显著性差异(P<0.05)。细胞免疫组织化学结果显示，对照组细胞胞浆内有大量棕黄色颗粒，在药物处理组中，随着药物浓度的加大，表达棕黄色的颗粒减少，且染色变浅。提示经17-AAG作用后，VEGF、Survivin蛋白表达逐渐下降。半定量RT-PCR检测结果显示，随药物浓度的加大，VEGFmRNA和SurvivinmRNA的表达水平逐步下降。 结论:HSP90抑制剂17-AAG对结肠癌细胞HT-29的生长增殖有明显的抑制作用，呈时间、剂量依赖性，并诱导其凋亡。17-AAG抑制HSP90，下调HT-29细胞中Survivln、VEGF的表达，是其抗结肠癌的重要作用机制。

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