类固醇受体共激活因子-3在膀胱癌中的表达及对膀胱癌增殖作用的影响

摘要

目的：研究类固醇受体共激活因子-3（Steroid Receptor Coactivator-3，SRC-3）在膀胱癌中的表达及其对膀胱癌增殖作用的影响
　　方法：实时荧光定量聚合酶链式反应(quantitative real time polymerase chain reaction，qRT-PCR)和western blot检测SRC-3 mRNA和蛋白在28例膀胱尿路上皮癌标本中的表达情况。构建 SRC-3腺病毒过表达载体以及 SRC-3小干扰RNA(small interference RNA, siRNA)转染膀胱癌EJ细胞和T24细胞。qRT-PCR检测SRC-3 mRNA过表达和沉默效果，Western blot分析过表达和沉默SRC-3后SRC-3蛋白表达水平。BrdU增殖实验检测过表达RC-3以及沉默SRC-3后，对膀胱癌EJ细胞和T24细胞增殖活性的影响。为了研究SRC-3的作用机制，在过表达和沉默SRC-3后，qRT-PCR和western blot检测CXC趋化因子受体-4（C-X-C chemokine receptor type-4，CXCR4）mRNA和蛋白表达情况。同时过表达SRC-3细胞株中转染CXCR4 siRNA沉默CXCR4基因，检测干扰CXCR4后对过表达SRC-3的膀胱癌细胞增殖活性的影响。
　　结果：实时荧光定量PCR和western blot结果显示SRC-3 mRNA和蛋白在71.4％（20/28）的膀胱癌标本中表达上调，同癌旁正常组织相比，表达倍数变化具有统计学差异（SRC-3 mRNA，Normal vs Bladder cancer：7.1±2.3 vs1.6±1.3，P<0.01）。过表达SRC-3后，Brdu增殖实验结果示膀胱癌EJ细胞和T24细胞增殖活性显著增强，差异具有统计学意义（EJ，EV vs SRC-3：0.5±0.4 vs0.8±0.6，P<0.05；T24，EV vs SRC-3：0.6±0.2，0.8±1.0，P<0.01）；而siRNA干扰SRC-3表达后，EJ细胞和T24细胞增殖活性显著下降，差异具有统计学意义（EJ，control vs siRNA：0.7±0.1 vs0.44±0.1，P<0.01；T24，control vs siRNA：0.78±0.2 vs0.43±0.06，P<0.01）。过表达SRC-3的膀胱癌细胞中，CXCR4 mRNA（P<0.05）和蛋白表达上调；沉默SRC-3后，CXCR4 mRNA（EV vs SRC-3：1.0±0.1 vs2.8±0.3，P<0.01）和蛋白表达下调。在过表达SRC-3细胞株中转染CXCR4 siRNA后，过表达SRC-3的膀胱癌EJ细胞增殖活性显著下降（EV vs SRC-3：0.87±0.2 vs0.58±0.4，P<0.05），同空白对照组相比，增殖活性无明显统计学差异。
　　结论：SRC-3在膀胱癌中过表达，通过调节CXCR4促进膀胱癌细胞增殖。

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序言

参考文献

第一部分 SRC-3在膀胱癌中的表达及其对膀胱癌细胞增值活力的影响

引言

材料与方法

实验结果

讨论

参考文献

第二部分 SRC-3 抑制膀胱癌细胞增殖机制研究

序言

材料与方法

结果

讨论

参考文献

总结与展望

一、 总结

二、 未来计划

综述: SRC-3促肿瘤作用的研究进展

中英文缩略词表

攻读学位期间公开发表的论文

致谢