翅鳞伞（Pholiota squarrosa）AS5.245发酵生产功能活性物质的研究

摘要

食药用真菌的子实体、菌丝体、菌核或孢子中含有丰富的生物学活性物质，对人体具有保健作用，对疾病尤其是肿瘤具有预防或治疗的功能，且大多数真菌的抗肿瘤活性是由于其具有特定结构的多糖和蛋白质的结合多糖体。目前，食药用真菌已经成为现代医学寻找具有抗肿瘤和免疫增强功能新药的一个重要资源。本文通过统计优化技术对该菌的液体发酵条件进行了研究，并对其发酵产生的胞内、胞外多糖以及粗蛋白组分进行了分离提取，便于对其生物学免疫活性进行研究，有利于开发出该菌的药用功效。 本文的主要研究结果如下： 1.采用统计优化技术(Box-Behnken设计法)对翅鳞伞AS5.245发酵条件的发酵温度、发酵时间以及接种量这三个因子进行优化，评价指标为该菌发酵液中的胞外多糖含量EPC。结果表明，在接种量为12.57mL、发酵时间为7.82d以及发酵温度为28.57℃时，翅鳞伞AS5.245液体发酵液中胞外多糖含量EPC预测值奇以达到853.727ug／mL。 2.利用正交实验设计对分离提取AS5.245胞内多糖的条件进行了研究，结果表明提取的最佳条件为：单位重量的翅鳞伞AS5.245菌丝体中加入20倍体积的蒸馏水，超声波浸提40min，沸水浴3hr，乙醇的添加量为70％的体积终浓度。 3.采用Box-Behnken设计法对醇沉法提取翅鳞伞AS5.245胞外多糖的条件进行了优化，结果表明：乙醇终浓度为84.71％、醇沉时间为19.99h以及醇沉温度为13.94℃时，胞外多糖得率的预测值可以达到11.56％，其概率为95％。 4.翅鳞伞AS5.245胞外多糖经DEAE Sephadex A-50以及Sephadex G-100凝胶柱层析进行纯化后，经190-400nm范围内紫外扫描检测，获得了一个多糖组分。采用高效凝胶过滤色谱法(HPGFC)测定的AS5.245胞外多糖重均分子量为32，597。该胞外多糖样品水解物经乙酰化后的Gc谱图表明，AS5.245胞外多糖的单糖组成为：甘露糖、葡萄糖、半乳糖，其近似整数比为3：2：1。 5.翅鳞伞AS5.245液体发酵生产的胞内、胞外多糖以及粗蛋白对Heps荷瘤小鼠的免疫器官均有一定的影响：荷瘤小鼠的脾指数分别为106.26±15.46-129.21± 25.99、127.92±46.64—172.01±89.66和113.53±23.48—124.81±39.17，阳性组为77.39±21.57；胸腺指数分别为27.27±4.61—29.12±8.53、19.99±6.94—30.00±8.02和26.32±9.50—26.86±6.12，阳性组为18.86±3.83；体重增长率分别为35.23—57.91％、1.05—24.35％和28.49—53.13％，阳性组为14.50％。研究结果表明，翅鳞伞AS5.245液体发酵生产的胞内、胞外多糖以及粗蛋白均可以显著提高Heps荷瘤小鼠免疫机体的脾指数、胸腺指数以及其体重增长率。

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文摘

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第一章食药用真菌的研究进展

第二章翅鳞伞AS5.245发酵条件的研究

第三章翅鳞伞AS5.245功能活性物质提取的研究

第四章翅鳞伞AS5.245功能活性物质免疫学活性的研究

全文结论

致谢