Human iPS培养液对延边黄牛体外受精卵发育的影响

摘要

为加强延边黄牛品种保存，保持物种的多样性和保护生态平衡，为延边黄牛品种资源开发和永续利用，本研究围绕如何提高延边黄牛体外生产胚胎移植妊娠率的关键点，从体外受精胚胎各阶段的培养方法，操作技术及移植囊胚质量等环节展开了深入研究，结果如下：
　　1.本试验对延边黄牛体外胚胎生产体系中，如何提高妊娠率的同时，降低生产成本、简化操作程序等方面进行探索研究。试验结果表明同培养液条件下廉价的35mm dish组的卵裂率显著高于（P<0.05）昂贵的4孔板组，囊胚发育率没有差异；PBS液精子处理组与BO液精子处理组卵裂率与囊胚率均没有差异，但PBS组相比BO组操作简便且成本低廉；受精时间的比较研究中PBS22h组比PBS6h组，BO6h、22h组都有显著性差异（P<0.05）。
　　2.提高囊胚质量和增加囊胚细胞数是十分重要的，含有大量细胞数的囊胚有利于单囊胚分析。正常情况下想要进行DNA的分析往往需要若干个囊胚才能做到，如果能增加单个囊胚的细胞数，我们仅需一个囊胚便可进行DNA分析。囊胚移植是目前为止牛胚胎移植技术最常用的方法，高质量形态的囊胚和具有大量细胞数的囊胚移植后可提高妊娠率。胚胎干细胞（ES）是来源于囊胚内细胞团（ICM），目前已建立人和小鼠的胚胎干细胞，但科学家试图从家畜建立ES细胞系都失败了，部分原因是由于没有制定合适的培养条件，因此，制备一种可获得更大内细胞团的新型体外培养体系，来提高ES细胞系建立的成功率迫在眉睫。
　　本试验通过比较人诱导多功能干细胞（hiPS）培养基与牛体外培养II型（B-IVC-II）培养基，探究了两种培养基对牛体外受精早期胚胎的影响。将体外受精后牛囊胚分别在hiPS培养基、B-IVC-II培养基中培养2天，测量囊胚直径，结果显示hiPS培养基组显著高于B-IVC-II培养基组，直径分别为150.30±29.49μm与195.58±41.59μm（P<0.01），并且牛囊胚总细胞数hiPS培养基组显著高于B-IVC-II培养基组，相差2倍之多，细胞数分别为172.12±45.08，604.83±242.64（P<0.01）。本实验结果表明，hiPS培养基可以显著提高牛囊胚的质量。
　　3.首次获得地方特色品种延边黄牛的体外受精胚胎移植牛。本试验通过以本地饲养量较大的延边黄牛作为受体母牛，通过胚胎移植技术手段改善肉牛繁殖效率，增加母牛产仔率等。同期发情技术、胚胎移植技术等生物技术的研究、改良及推广，能够加速规模化养殖进程，在地方特色品种的保护和扩繁上发挥关键性作用。本实验表明同期发情组1（添加维生素ADE）、同期发情组2和自然发情各组之间无显著差异（P<0.05），其中受胎率最高组为同期发情组1，共同期发情43头，胚胎移植27头，妊娠8头，产犊7头，其受胎率和产犊率分别是29.63％和16.28%；受胎率最低组为自然发情组，共胚胎移植19头，妊娠4头，产犊2头（双胎）见图4.1，其受胎率和产犊率分别是21.43%和10.53%；同期发情组2共同期发情49头，胚胎移植38头，妊娠10头，产犊8头，其受胎率和产犊率分别是26.28%和21.05%。

目录

声明

第一章 文献综述

1.1 牛的体外受精技术

1.2牛胚胎体外培养方法研究进展

1.3 胚胎移植技术研究进展

第二章 延边黄牛卵母细胞体外受精技术研究

2.1 试验材料

2.2 试验方法

2.3 结果

2.4 讨论

2.5 小结

第三章 在人诱导多功能干细胞培养液中生产高质量的牛囊胚

3.1试验材料

3.2试验方法

3.3结果

3.4讨论

3.5小结

第四章 延边黄牛胚胎移植技术研究

4.1 试验材料

4.2 试验方法

4.3 结果

4.4 讨论

4.5 小结

第五章 全文结论

创新点

参考文献

附录:图

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