利用基因芯片技术筛选Gemcitabine诱导胰腺癌Panc-1细胞凋亡相关基因的研究

摘要

目的:胰腺癌是腹部外科最常见的恶性肿瘤之一，手术切除率低，预后差。吉斯他滨(Gemcitabine)可明显改善晚期胰腺癌病人的预后，诱导胰腺癌细胞凋亡，但其机制不清楚。本研究通过观察Gemaitabine诱导胰腺癌细胞凋亡前后凋亡相关基因表达的改变，筛选差异凋亡相关基因；并进一步用实时荧光定量PCR验证凋亡关键基因。探讨Gemaitabine诱导胰腺癌细胞凋亡的途径。 方法:体外培养胰腺癌细胞Panc-1，用四唑盐比色试验(MTT法)检测Gemcitabine对胰腺癌Panc-1细胞生长的抑制率，得到Gemcitabine抑制胰腺癌Panc-1细胞生长的半数有效浓度(IC<,50>)；流式细胞术(FCM)检测用IC<,50>的Gemcitabine诱导后胰腺癌Panc-1细胞的凋亡率；分别用药物诱导组和对照组细胞mRNA逆转录标记探针，进行芯片杂交，筛选胰腺癌Panc-1细胞凋亡差异表达基因，分析凋亡差异表达基因与凋亡通路及凋亡调控的关系；用实时荧光定量PCR验证其凋亡通路关键基因ASKl。 结果: MTT法显示Gemcitabine抑制胰腺癌Panc-1细胞生长的IC<'50>为50.33μg／ml；用50.33μg／ml浓度Gemcitabine培养细胞48小时后，细胞凋亡率明显升高；基因芯片筛选到17个差异表达凋亡相关基因，其中CyclinBl、ASKl、AKT2基因高表达，IRF-4、Scotin、14-3-3gamma．、PDE、GRPS、TIDl、AFP、STAT5、Sox-4、c-Rel、NDSO、htt、CatD、gD基因低表达；结果显示Gemcitabine诱导胰腺癌Panc-l细胞凋亡通过非依赖caspase ASK1途径;实时荧光定量PCR检测到ASK1基因的高表达。 结论:Gemcitabine诱导胰腺癌Panc-1细胞凋亡通过非依赖caspase ASKl途径;Gemcitabine诱导胰腺癌Panc-1细胞凋亡与CyclinBl、AKT2基因高表达,IRF-4、Scotin、14-3-3gamma、PDE、GRPS、TIDI、AFP、STAT5、Sox-4、c-Rel、NDSO、htt、CatD、gD基因低表达有关;PDE4低表达、c-Rel低表达、gD低表达、cyclinB1高表达、AFP低表达、ASK1高表达,促进细胞凋亡;Gemcitabine诱导胰腺癌Panc-1细胞凋亡,不通过膜死亡受体通路、线粒体途径和ASK1线粒体途径。

目录

文摘

英文文摘

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1前言

2材料与方法

3结果

4讨论

5结论

参考文献

综述

致谢

攻读学位期间的研究成果