玻璃化法冷冻保存兔椎间盘冻存试剂的选择

摘要

目的：研究玻璃化冻存试剂（cryoprotectantagent,CPA）对于兔髓核细胞的毒性作用，从而为玻璃化冻存椎间盘选择合适的冻存试剂。
　　方法：选取目前最常用的五种玻璃化冻存试剂：二甲基亚砜、甲酰胺、乙二醇、丙二醇、丙三醇，任意两种及三种CPA互相组合成10种2-CPA,10种3-CPA。用CCK-8和FDA/PI两种方法检测髓核细胞的细胞存活率。用统计学方法对所得数据进行统计分析，选出对髓核细胞毒性较小的玻璃化冻存试剂组合方案，并观察所选方案对玻璃化冻存兔椎间盘的保存效果。
　　结果：两种检测方法检测结果基本一致，五种玻璃化试剂对髓核细胞的毒性由小到大依次为：乙二醇、丙三醇、甲酰胺、二甲基亚砜、丙二醇。2-CPA和3-CPA的毒性均比组成该组合溶液的任意一种单一CPA小。组合试剂中，含有乙二醇或丙三醇的2-CPA或3-CPA毒性均较小。玻璃化保存组的兔腰椎间盘髓核细胞存活率和相对活性均优于低温冷冻组。
　　结论：玻璃化冻存椎间盘可选用包含乙二醇和（或）丙三醇的玻璃化组合试剂。

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前言

材料与方法

1 材料

1.1 时间及地点

1.2 实验动物

1.3 试剂和仪器

2 方法

2.1 兔椎间盘取材

2.2 髓核细胞取材

2.3 细胞培养

2.4 玻璃化试剂的配制

2.5 CPA对髓核细胞毒性检测

2.6 观察所选冻存试剂的冻存效果

2.7 保存效果检测

3 统计学分析

结果

附图

附表

讨论

结论

参考文献

综述:玻璃化法冷冻保存生物细胞、组织和器官的原理分析

致谢

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