丝裂霉素纳米粉针剂的生物相容性与稳定性试验研究

摘要

本课题研究的注射用丝裂霉素C(MitomycinC，MMC)-聚氰基丙烯酸正丁酯(polybutylcyanoacrylate，PBCA)纳米粒(Iaanoparticle，NP)是一种用于治疗肝癌的新型被动靶向制剂。文献报道尚处于实验室研究阶段，未见其生产和应用于临床的报道。本研究是在优选出制备MMC-PBCA-NP的最佳工艺的基础上，对MMC-PBCA-NP的纯化、灭菌和冻干工艺进行探讨；并对制剂的生物相容性和稳定性进行了考察。本研究的主要研究方法、内容和结论包括以下几个方面： 论文的第一部分：MMC-PBCA-NP的制备及纯化、灭菌和冻干工艺考察：在最佳制备工艺的条件下(投料量分别是：BCA：0.7％(v/v)；Dextran-70：3.5％(w/v)；MMC：0.04％(w/v))，采用乳化聚合法，在室温下避光磁力搅拌3h得到MMC-PBCA-NP初乳，再用微射流高压均质机将MMC-PBCA-NP初乳处理成粒径100nm左右的胶体溶液。微射流机的工作原理是：物料通过均质阀的孔隙时，在高压下经强剪切和冲击力的作用被瞬间超微破碎、乳化、分散。经过几次循环，可得到粒径大小在100nm左右的稳定的胶体溶液。透射电镜下观察纳米粒为光滑圆整的球形，纳米粒之间无粘连。光子相关光谱仪(Photon CorrelationSpectroscopy，PCS)测得平均数均粒径为102±5.85nm。用紫外分光光度法测得包封率(EE)=85.27±1.50％，载药量(DL)=6.97±0.14％。然后对制剂的纯化、灭菌、干燥工艺进行了考察。试验结果表明：采用超速冷冻离心法，在4℃时以20000rpm的转速离心30min，洗涤离心三次能达到很好的纯化效果；采用<'60>C。射线灭菌，剂量为6kGy，辐照时间为7.5h可以达到较好的灭菌效果；以5％乳糖为冻干保护剂冷冻干燥样品可以得到光滑圆整的MMC-PBCA-NP冻干品。 论文的第二部分：MMC-PBCA-NP的生物相容性试验研究，主要考察了样品的急性毒性、溶血性和是否含有热原。采用KM小鼠单剂量尾静脉注射(iv)MMC-PBCA-NP、MMC和PBCA-NP，观察14d，记录其毒性反应情况及死亡数，计算制剂的LD<,50>。结果：MMC、MMC-PBCA-NP、PBCA-NP的LD<,50>分别是12.2mg.kg<'-1>、52.8mg.kg<'-1>、296.3mg.kg<'-1>；其95％可信区间分别是8.56～17.4mg.kg<'-1>、47.3～61.6 mg.kg<'-1>和234.2～374.9mg.kg<'-1>。结果表明MMC经高分子载体材料PBCA包裹成纳米粒后，毒性大大降低，而PBCA毒性很低，与有关文献报道一致。参照《新药研究的技术要求》，采用溶血试验考察了制剂的溶血性，结果表明MMC-PBCA-NP无溶血性。参照《中国药典》2005版附录XID进行了热原检查，结果表明用该方法制备的MMC-PBCA-NP不含热原。初步表明该试剂可供静脉注射用。 论文第三部分：MMC-PBCA-NP的初步稳定性研究。采用加速试验，在温度40±2℃，湿度75±5％的条件下考察了三批MMC-PBCA-NP冻干品的稳定性，一共考察3个月，分别于0、1、2、3月取样。检测项目包括性状、鉴别、检查、含量测定，具体考察项目为外观色泽、含量、PH值、粒径、载药量、再分散性、再分散后的澄明度等。作为对照，在室温下考察MMC-PBCA-NP胶体溶液的稳定性三个月，考察项目同上。结果：在加速试验考察期内，MMC-PBCA-NP的外观色泽符合要求，含量没有降低，PH在规定范围内，粒径、载药量均无明显改变，再分散性良好，澄明度合乎要求。在室温稳定性试验考察期内，Dn逐渐增大，DL逐渐减小，胶体溶液颜色逐渐加深，并有絮凝现象出现。说明随着时间的推移，MMC-PBCA-NP胶体溶液不稳定。同时说明将MMC-PBCA-NP胶体溶液冷冻干燥后，可大大提高其稳定性。

目录

文摘

英文文摘

声明

第一章绪论

1.1纳米粒载药系统的研究进展

1.1.1纳米粒载药系统的作用机制

1.1.2纳米粒载药系统的优点

1.1.3理想的纳米粒载药系统

1.1.4纳米粒载药系统的释药机理

1.1.5氰基丙烯酸烷酯(Polyalkylcyanocraylate,PACA)纳米粒载药系统及制备方法

1.1.6 PACA-NP作为肝靶向给药系统

1.1.7 PACA毒理学研究及PACA-NP的降解

1.2 MMC的研究进展

1.3本研究的目的

1.4主要工作内容

1.5创新性

第二章乳化聚合法结合微射流技术制备MMC-PBCA-NP冻干品及其纯化和灭菌方法考察

引言

实验部分

2.1材料及仪器

2.2方法和结果

2.3讨论

2.4小结

第三章MMC-PBCA-NP粉针剂的生物相容性试验

引言

第一节MMC-PBCA-NP粉针剂的急性毒性试验

第二节溶血试验及热原检查

第四章MMC-PBCA-NP粉针剂的初步稳定性考察

引言

实验部分

4.1仪器与试剂

4.2试验方法

4.3试验结果

4.4讨论

4.5小结

全文总结

参考文献

附录

硕士期间发表的文章

致谢