支气管哮喘患者外周血中NK/NKT细胞的测定及意义

摘要

一.研究背景： 支气管哮喘(简称哮喘)是由多种炎症细胞、气道上皮细胞、及细胞组分参与的慢性变态反应性疾病。哮喘的发病机制十分复杂，诸多因素参与其中，迄今为止尚未完全阐明。“卫生学假说”即“Th1/Th2”型细胞失衡学说，是目前公认的最重要的哮喘发病机制。在此基础上，研究者又相继提出了一系列新的观点来补充和完善哮喘的免疫学理论。天然免疫细胞家族：NK、NKT、DC(树突状细胞)、γdT细胞等，由于其可以形成独特的天然免疫调节网络，并且对机体免疫应答起到重要的调节作用，引起学术界广泛的关注。 NK细胞(Naturalkillercells)是一类分布于外周血、脾脏中的大颗粒淋巴细胞，具有免疫监视功能被称为机体免疫防御系统的第一道屏障。NK细胞是重要的免疫调节细胞，其免疫调节作用是通过分泌IFN-γ、GM-CSF等细胞因子来实现的。NKT细胞(NaturalkillerTcells/CDld-dependentnaturekiller-likeTcells)是近年来发现的一类新型的淋巴细胞，具有T细胞和NK细胞双重细胞特性。目前研究显示：NKT细胞在自身免疫性疾病包括糖尿病、实验性自身免疫性脑脊髓膜炎、酮诱导的大肠炎等疾病中表现出强大的调节能力，影响免疫反应类型，使免疫反应向Th1或Th2方向转换。因此，通过研究NKT细胞在哮喘发病中的表达情况，可以进一步探讨哮喘的发病机制，今后为哮喘的诊治提供理论依据。 二.研究目的： 本实验采用微量全血流式细胞仪对正常人群、哮喘轻度、中度、重度组(共计四组)研究对象，外周血中NK细胞和NKT细胞的含量进行检测；同时对应记录每个样本的嗜酸性粒细胞总数EOSg/l、FEV1占预计值百分比(FEV1％)；并研究其规律及与NK细胞和NKT细胞含量的相关性。通过对上述两种细胞的研究，深入探讨哮喘的发病机制，为哮喘的诊治提供新的理论依据。 三.研究对象和方法： 1.研究对象的筛选 临床选取哮喘患者根据其病情分为轻度组30例，中度组28例，重度组22例及正常对照者30例，共计110例(男59例，女51例)。各组年龄、性别均无显著性差异，所有研究对象均知情同意，配合研究。 2.实验方法 实验1:运用微量全血流式细胞仪检测外周血中NK细胞含量 实验2：运用微量全血流式细胞仪检测外周血中NKT细胞含量 3.实验结果分别与EOSg/l总数、FEV1％进行分析比较 实验1: (1)所有受试者均抽取静脉血，进行血常规五分类检查，按哮喘轻、中、重度组，正常组分类统计，比较各组别嗜酸性粒细胞总数(EOSg/l)之间的差异，并与各组相应NK细胞含量进行相关分析。 (2)肺通气功能测定使用MS-IOSDIGITAL型JAEGER震荡描记仪(德国)，按规定校准后测定。记录哮喘轻度组、中度组、重度组FEV1占预计值百分比(FEV1％)，并与各组相应NK细胞含量进行相关分析。 实验2： (1)所有受试者均抽取静脉血，进行血常规五分类检查，按哮喘轻、中、重度组，正常组分类统计，比较各组别嗜酸性粒细胞总数(EOSg/l)之间的差异，并与各组相应NKT细胞含量进行相关分析。 (2)肺通气功能测定使用MS-IOSDIGITAL型JAEGER震荡描记仪(德国)，按规定校准后测定。记录哮喘轻度组、中、重度组FEV1占预计值百分比(FEV1％)，并与各组相应NKT细胞含量进行相关分析。 4.统计学处理 运用SPSS13.0软件，各组结果以χ±s表示。两样本均数比较采用两独立样本t检验；多组比较采用单向方差分析(One-WayANOVA)；各组间比较采用LSD或Dunnetts法；相关性检验用Pearson相关分析。检验水准a=0.05，P<0.05表示差异有统计学意义。 四.结果： 1.应用流式细胞术检测外周血中NK细胞含量 正常组(22.54±+4.50)％，轻度组(19.14±5.90)％，中度组(15.64±6.23)％，重度组(14.40±6.21)％。 统计学分析显示：轻度组、中度组、重度组与正常组比较，均有显著性差异(F=10.534，P值分别为0.024、0.000、0.000)；中度组、重度组与轻度组比较，差异均有统计学意义(F=10.534，P值分别为0.033、0.005)；中度组和重度组两组之间比较无差异性(F=10.534，P=0.487)。 2.应用微量全血流式细胞仪检测外周血中NKT细胞含量 正常组(0.84±0.40)％，轻度组(0.707±0.30)％，中度组(0.49+0.30)％，重度组(0.435±0.22)％。 统计学分析显示： 中度组、重度组与正常组比较，均有显著性差异(F=8.724，P值分别为0.000、0.000)；轻度组与正常组比较，无显著性差异(F=8.724，P值为0.109)；中度组、重度组与轻度组比较，差异均有统计学意义(F=8.724，P值分别为0.020、0.005)；中度组和重度组之间两组比较无差异性(F=8.724，P=0.574)。 3.检测结果与其对应的临床相关检查进行比较 (1)嗜酸性粒细胞总数为：正常组(0.12±0.091)g/l，轻度组(0.80±0.30)g/l，中度组(0.98±0.21)g/l，重度组(1.075±0.31)g/l。 统计学分析显示： ①轻度、中度、重度组与正常组比较，差异均有统计学意义(F=82.274，P值分别为0.000、0.000、0.000)；轻度组与中度、重度组之间比较有显著性差异(F=82.274，P值分别为0.017、0.000)；中度组与重度组比较无显著性差异(F=82.274，P=0.159)。 ②正常组NK细胞含量与嗜酸性粒细胞总数之间相关系数r=0.115，P=0.546；轻度组NK细胞含量与嗜酸性粒细胞总数之间相关系数r=-0.075，P=0.706；中度组NK细胞含量与嗜酸性粒细胞总数之间相关系数r=-0.469，P=0.028；重度组NK细胞含量与嗜酸性粒细胞总数之间相关系数r=-0.464，P=0.039。 ③正常组NKT细胞含量与嗜酸性粒细胞总数之间相关系数r=0.030，P=0.987；轻度组NKT细胞含量与嗜酸性粒细胞总数之间相关系数r=-0.600，P=0.781；中度组NKT细胞含量与嗜酸性粒细胞总数之间相关系数r=-0.480，P=0.024；重度组NKT细胞含量与嗜酸性粒细胞总数之间相关系数r=-0.486，P=0.030。 (2)FEV1％分别为：正常组(101±2.1)％，轻度组(87.9±4.6)％，中度组(70.5±5.7)％，重度组(56.6±1.7)％。 统计学分析显示： ①哮喘轻度组与中、重度组比较，差异均有统计学意义(F=295.474，P值分别为0.000、0.000)；中度与重度组之间有显著性差异(F=295.474，P=0.000)。 ②正常组NK细胞含量与FEV1％之间相关系数r=-0.485，P=0.839；轻度组NK细胞含量与FEV1％之间相关系数r=-0.131，P=0.505；中度组NK细胞含量与FEV1％之间相关系数r=0.713，P=0.000；重度组NK细胞含量与FEV1％之间相关系数r=0.653，P=0.002。 ③正常组NKT细胞含量与FEV1％之间相关系数r=-0.0751，P=0.554； 轻度组NKT细胞含量与FEV1％之间相关系数r=-0.086，P=0.665；中度组NKT细胞含量与FEV1％之间相关系数r=0.499，P=0.018；重度组NKT细胞含量与FEV1％之间相关系数r=0.545，P=0.013。 五.结论： 1、哮喘轻度组、中度组、重度组患者外周血中NK细胞含量均低于正常组；中度组、重度组患者外周血中NK细胞含量均低于轻度组；中度组和重度组两组之间比较NK细胞含量无显著性差异。 2、哮喘中度组、重度组患者外周血中NKT细胞含量均低于正常组；中度组、重度组外周血中NKT细胞含量均低于轻度组；轻度组和正常组两组之间比较NKT细胞含量无差异性；中度组和重度组两组之间比较NKT细胞含量无差异性。 3、各组间外周血嗜酸粒细胞总数存在显著性差异：正常组最低，重度组最高。哮喘中度组、重度组NK细胞含量与嗜酸粒细胞总数之间存在负相关关系。哮喘中度组、重度组患者外周血中测定的NKT细胞含量与嗜酸粒细胞总数之间存在负相关关系。 4、各组间FEV1％存在显著性差异，轻度组最高，重度哮喘组最低。哮喘中、重度组患者外周血中测定的NK细胞含量与FEV1％之间存在正相关关系。哮喘中、重度组患者外周血中测定的NKT细胞含量与FEV1％之间存在正相关关系。 5、本研究证明了哮喘组外周血NK细胞、NKT细胞数量均显著低于正常组，并伴随哮喘病情的演进显著减少，并且与嗜酸粒细胞总数进行相关性分析结果呈负相关关系，与肺功能检测指标FEV1％之间呈正相关关系。 6、通过对NK细胞和NKT细胞的研究，可以丰富哮喘免疫学说，为哮喘的诊治提供新的理论依据。

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文摘

英文文摘

论文说明：中英文缩略词表

声明

前言

第一部分支气管哮喘患者外周血中NK细胞含量的测定及意义

材料和方法

结果

讨论

结论

第二部分支气管哮喘患者外周血中NKT细胞含量的检测

材料和方法

结果

讨论

结论

全文总结

附图

参考文献

论文发表情况

致谢

研究生毕业论文统计学审稿证明