递增负荷运动对大鼠下丘脑ARC-ME GnRH及垂体GnRHR表达的影响

摘要

研究目的：
　　 在大鼠进行六周递增负荷运动并逐渐形成运动性免疫机能失衡的过程中，观察下丘脑ARC-ME促性腺激素释放激素（Gonadotropin releasing hormone，GnRH）以及垂体促性腺激素释放激素受体（Gonadotropin releasing hormone，GnRHR）receptor）的应答性与适应性变化。
　　 研究方法：
　　 72只SPF级SD雄性大鼠进行六周递增负荷运动训练，于第0周即训练前和第2、4、6周末，在运动前安静状态、运动后即刻和运动后3小时分别进行全身灌流4％多聚甲醛，断头取脑和垂体后免疫组织化学染色检测下丘脑ARC-ME GnRH及垂体GnRHR分泌和表达的多少。
　　 研究结果：
　　 1、GnRH免疫组化染色结果
　　 GnRH阳性物质不是在所有的弓状核都有表达而是主要集中在有ME存在区域即ARC-ME区域，该区域出现明显的阳性物质，且呈黄褐色，部分阳性区域因GnRH表达量多呈现红褐色，GnRH的神经纤维清晰可见。随着运动时间的延长，GnRH表达的区域未见明显减少，但是GnRH表达的密度以及GnRH神经纤维的密度却明显降低，对照组大鼠在六周的时间里GnRH变化无显著性差异，说明GnRH在此阶段无显著性增龄性变化。
　　 2、GnRH的应答性变化结果
　　 急性运动后GnRH细胞的分布发生变化且变化不一，与0、2、4、6周大鼠A组相比，J组、3h组均无显著性差异（P>0.05）。
　　 3、GnRH的适应性交化结果
　　 六周递增负荷运动后，GnRH细胞分布呈现出增多后减少又增多的趋势，与0周A组、J组和3h组相比，2周组末、4周组末、6周组末各组GnRH的分泌呈现渐进性下降的趋势。4周各组较2周各组GnRH分泌有下降趋势，但数理统计无差异（P>0.05），6周各组较4周各组GnRH分泌有下降趋势，但数理统计无差异（P>0.05），6周较0周和2周GnRH分泌有大幅度下降且具有极显著性差异（P<0.01）。
　　 4、GnRHR的免疫组化染色结果
　　 阳性的表达主要集中于腺垂体的中间部，整个细胞的轮廓清晰可见，阳性物质的表达主要集中于促性腺细胞的细胞膜，呈明显的黄褐色，细胞核未着色。随着运动时间的延长，细胞轮廓开始变模糊，促性腺细胞膜上GnRHR的表达也由深变浅，阳性物质的表达密度明显降低，到第六周细胞膜上GnRHR的表达呈现明显的离散状态，对照组大鼠在六周的时间里GnRHR变化无显著性差异，说明GnRHR在此阶段无显著性增龄性变化。
　　 5、GnRHR在0、2、4、6周的应答性变化结果
　　 急性运动后GnRHR的表达减少，Gn细胞的轮廓变模糊，与0、2、4、6周大鼠A组相比，J组、3h组均无显著性差异（P>0.05）。
　　 6、GnRHR在0、2、4、6周的适应性变化结果
　　 六周递增负荷运动后，GnRH阳性物质分泌呈现渐进性减少，Gn细胞膜轮廓变模糊，与0周A组、J组和3h组相比，2周组末、4周组末、6周组末各组GnRHR表达呈现渐进性下降的趋势。4周各组较2周各组GnRHR表达有下降趋势，但数理统计无差异（P>0.05），6周各组较4周各组GnRHR表达有下降趋势，但数理统计无差异（P>0.05），6周较0周和2周GnRHR表达有大幅度下降且具有极显著性差异（P<0.01）。
　　 7、GnHR和GnRHR的对比性分析变化结果
　　 通过对GnRH分泌和GnRHR表达在六周递增负荷跑台运动过程中的表达的对比发现：运动过程中，GnRH分泌与GnRHR表达的应答性变化均出现减少，但下降拐点不同步，无显著性差异。0周、2周GnRH分泌和GnRHR表达的适应性表达变化不大，两者从4周组末开始出现明显的下降，且随着运动负荷的增加呈现持续下降的趋势，两者呈现出不同步下降的趋势，6周末GnRH分泌继续持续下降，GnRHR表达有上升的趋势，体现了受体的“上调”。
　　 研究结论：
　　 1、急性运动后GnRH细胞的分布发生变化且变化不一。GnRH阳性物质对急性运动刺激的应答性反应表现为运动后即刻GnRH分泌下降，运动后3小时GnRH分泌恢复到运动前安静状态的水平，急性运动对GnRH阳性物质分泌无显著性影响。
　　 2、六周递增负荷运动后，GnRH细胞分布呈现出增多后减少又增多的趋势。GnRH阳性物质分泌呈现渐进性减少，且随着运动负荷的增加，GnRH减少的幅度变小，这可能与机体适应了这种运动模型，对刺激的反应更加精确有关。
　　 3、急性运动后GnRHR的表达减少，Gn细胞的轮廓变模糊。GnRHR阳性物质对急性运动刺激的应答性反应表现为运动后即刻GnRHR分泌下降，运动后3小时GnRH分泌恢复到运动前安静状态的水平，急性运动对GnRHR阳性物质表达无显著性影响。
　　 4、六周递增负荷运动后，GnRHR阳性物质分泌呈现渐进性减少，Gn细胞膜轮廓变模糊，且随着运动负荷的增加，GnRHR减少的幅度变小，这可能与机体适应了这种运动模型，对刺激的反应更加精确有关。
　　 5、GnRH和GnRHR对急性运动刺激的应答性反应表现为运动后即刻GnRH分泌和GnRHR表达下降，且两者呈现出变化基本一致的趋势，但无显著性影响。GnRH和GnRHR对长期的递增负荷的刺激的适应性均表现为运动强度递增时，GnRH分泌和GnRHR的表达下降幅度减小。

目录

文摘

英文文摘

英文词表

前言

1 文献综述

1．1 下丘脑—垂体—性腺轴调控机理

1．2 下丘脑和垂体的知识

1．2．1 下丘脑知识

1．2．2 垂体知识

1．3 GnRH的生理学简介

1．4 GnRHR的生理学简介

1．5 信息分子对GnRH与GnRHR分泌的影响

1．6 运动对GnRH以及GnRHR分泌的影响

2 选题依据及研究意义

3 研究正文

3．1 研究材料

3．1．1 研究对象

3．1．2 饲养环境

3．1．3 分组

3．2 实验方案

3．2．1 运动方案

3．2．2 常规观测

3．2．3 实验过程

3．3 试剂和仪器

3．3．1 试剂

3．3．2 仪器

3．4 指标测试

3．4．1 指标GnRH的染色操作

3．4．2 指标GnRHR的染色操作

3．4．3 对照实验

3．5 图像处理及数理统计

4 研究结果

4．1 六周递增负荷运动过程中ARC—ME GnRH表达的应答性与适应性变化

4．1．1 GnRH免疫组化染色观察结果

4．1．2 下丘脑ARC—ME GnRH表达的应答性的变化

4．1．3 下丘脑ARC—ME GnRH表达的适应性变化

4．2 六周递增负荷运动过程中垂体GnRHR表达的应答性与适应性变化

4．2．1 GnRHR免疫组化染色观察结果

4．2．2 垂体GnRHR表达的应答性变化

4．2．3 垂体GnRHR表达的适应性变化

4．3 六周递增负荷运动过程中下丘脑ARC—ME GnRH与垂体上GnRHR表达的对比变化

5 分析与讨论

5．1 免疫组化染色结果采用MOD表示的意义

5．2 大鼠六周递增负荷运动过程中的应答性和适应性变化

5．2．1 六周递增负荷运动过程中大鼠下丘脑 ARC-ME GnRH 表达的应答性与适应性变化特征及其因素分析

5．2．2 六周递增负荷运动中大鼠垂体GnRHR表达的应答性与适应性变化特征及其因素分析

5．2．3 六周递增负荷运动中大鼠下丘脑ARC—ME GnRH与垂体GnRHR表达的对比分析变化

6 结 论

7 参考文献

8 致 谢

附 录