中国人面肩肱型肌营养不良症4q亚端粒区等位基因4qA/4qB结构特征的研究

摘要

一、研究目的： 1、研究中国人群面肩肱型肌营养不良症(FSHD)连锁位点，4q35亚端粒区等位基因4qA/4qB的的结构特征，分析等位基因频率和基因型频率，探讨其分布规律及易位与D4Z4重复单位缺失的关系。 2、研究FSHD患者等位基因4qA/4qB的结构特征，探讨其特异性分布规律与FSHD的关系。 3、研究4qA/4qB基因型与FSHD临床表型的关系，初步探讨等位基因4qA/4qB在FSHD分子发病机制中的作用。 二、研究方法： 1、采用EcoRⅠ酶切、EcoRⅠ/BlnⅠ双酶切基因组DNA，脉冲电场电泳分离(PFGE)，P13E-11探针Southern杂交，检测正常人群及FSHD患者4q35区EcoRⅠ片段，曲线拟合计算片段大小，并判断片段的4q和10q来源。 2、同时采用HindⅢ酶切基因组DNA，PFGE电泳分离，4qA探针、4qB探针Southern杂交，判断正常人群及FSHD患者4q35区EcoRⅠ片段为4qA型或4qB型，曲线拟合计算各型EcoRⅠ片段的大小。采用χ2检验比较正常人和FSHD患者的4qA/4qB基因频率和基因型频率差异；t检验比较各型EcoRⅠ片段长度的差异。 3、判断4qA型、4qB型杂交片段的4q和10q来源，分析4qA/4qB与10q26间的相互易位形式和易位频率。采用χ2检验比较正常人、散发型FSHD和家族型FSHD患者的易位频率差异。 4、采用t检验比较4qA/4qB不同基因型患者发病年龄的差异；采用线性回归法分析患者致病片段大小与不同基因型的关系，以及发病年龄与致病型EcoRⅠ片段长度的关系。 三、研究结果： 1、正常人群4qA/4qB基因频率及基因型频率分布：82名正常人中，4号染色体上4qA、4qB的基因频率分别为47.6％和52.4％，两者无显著性差异(P=0.383＞0.05)，男性和女性4qA/4qB基因频率无显著性差异(P=0.995＞0.05)；4qA纯合型占20％(15/75)，4qB纯合型占26.7％(20/75)，4qA/4qB杂合型占53.3％(40/75)，杂合型与纯合型频率分布有显著性差异(P=0.001＜0.05)，4qA纯合型与4qB纯合型分布差异无显著性(P=0.334＞0.05)。 2、正常人群4qA、4qB片段长度及易位分布：60名正常人中，4qA片段长度均值为(89.2±10.9)kb，中位数为81kb；4qB片段长度均值为(86.8±10.1)kb，中位数为74kb。等位基因4qA/4qB片段长度的分布无显著性差异(t=0.329，P＞0.05)。两名个体发现小于35kb的4qA型EcoRⅠ片段，占3.3％；两名个体出现小于35kb的4qB型EcoRⅠ片段，占3.3％。易位型占11.7％(7/60)，其中10q→4qA易位占8.3％(5/60)，10q→4qB易位占3.3％(2/60)，未发现4qB→10q易位和4qA→10q易位。 3、FSHD患者的4qA、4qB片段分布特点：26名FSHD患者中，均检测到一条长度小于35kb的4q35EcoRⅠ致病性片段，片段大小14～34.5kb，平均长度为21.2kb，均为4qA型；1名患者同时存在31.5kb的短4qB型EcoRⅠ片段。散发型患者易位频率为29.4％(5/17)，明显高于家族型易位频率11.1％和正常人的易位频率11.7％。4号染色体上4qA基因频率为64.4％，4qB基因频率为35.6％，与正常人群中4qA、4qB分布频率有显著性差异(P=0.026＜0.05)。 4、4qA/4qB基因型与临床表型关系分析：4qA纯合型患者占35％(7/20)，该型患者中男性85.7％明显多于女性14.3％(P=0.029＜0.05)；4qA/4qB杂合型患者占65％(13/20)；无4qB纯合型。患者的发病年龄与4qA型EcoRⅠ片段大小成明显正相关(r=0.476，P＜0.05)，4qA纯合型患者发病年龄明显早于4qA/4qB杂合型患者(t=8.243，P＜0.01)，4qA纯合型和4qA/4qB杂合型患者致病片段长度无显著性差异(P=0.189＞0.05)。 四、研究结论： 1、中国人群4q35区等位基因4qA/4qB的基因频率相近；不同种族间4qA/4qB基因频率分布一致；4qA杂合基因型频率明显高于纯合基因型频率，4qA和4qB纯合基因型频率无显著差异；4qA/4qB的片段长度存在多态性；。 2、FSHD患者中4qEcoRⅠ致病片段均为4qA型，短的4qB型EcoRⅠ片段不致病，提示4qA与FSHD发病相关。 3、患者中4qA基因频率及4qA纯合基因型频率明显高于正常人，4qA纯合型患者发病年龄明显早于4qA/4qB杂合型患者，提示FSHD可能存在4qA-D4Z4协同或4qB-D4Z4拮抗效应。 4、4qA纯合型患者中女性比例明显低于男性，可能是导致女性FSHD患者对疾病“高耐受性”的机制之一。

目录

摘要

前 言

第一部分中国人4q亚端粒区等位基因4qA和4qB结构特征的研究

第二部分4q亚端粒等位基因4qA/4qB分布与FSHD的关系

结论

参考文献

面肩肱型肌营养不良症发病机制的研究进展

致 谢