文摘
英文文摘
论文说明:英文缩略表
声明
第一章绪论
1.1研究的目的意义
1.2国内外的研究现状
1.3研究内容和方法
1.3.1 Tso118基因的克隆和优化表达
1.3.2重组活载体口服疫苗的构建
1.3.3重组活载体疫苗的免疫学研究
第二章Tso118基因的克隆、优化表达及高免血清的制备
2.1实验材料
2.1.1菌种和试剂
2.1.2仪器与设备
2.1.3培养基
2.1.4溶液的配制
2.1.5实验动物
2.2实验方法
2.2.1猪带绦虫虫卵的活化
2.2.2六钩蚴总RNA的提取
2.2.3 Tso118基因的RT-PCR扩增
2.2.4 pGEX-4T-Tso118表达载体的构建
2.2.5重组质粒的诱导表达
2.2.6表达产物的检测
2.2.7表达产物的表达形式分析
2.2.8表达蛋白纯化和稳定性分析
2.2.9重组蛋白Tso118高免血清的制备
2.3结果
2.3.1 Tso118的RT-PCR扩增
2.3.2表达载体的鉴定与序列分析
2.3.3表达产物的检测
2.3.4表达蛋白纯化和稳定性分析
2.3.5免疫兔血清的效价
2.4讨论
2.4.1选择Tso118作为免疫保护基因的原因
2.4.2 Tso118的表达形式和稳定性
第三章表达Tso118抗原的重组减毒鼠伤寒沙门氏菌疫苗菌的构建
3.1实验材料
3.1.1菌种和质粒
3.1.2实验动物
3.1.3主要试剂和耗材
3.1.4培养基
3.1.5溶液的配制
3.2实验方法
3.2.1 TsoL18目的基因的制备
3.2.2 pYA3341-Tso118重组质粒的构建和筛选
3.2.3 pYA3341-Tso118重组质粒依次转化减毒鼠伤寒沙门氏菌X3730和X4550
3.2.4 4550(pYA3341-Tso118)重组菌表达蛋白的测定
3.2.5重组菌的体外稳定性试验
3.2.6重组菌生长曲线的测定
3.2.7重组菌的安全性试验
3.2.8重组疫苗株口服免疫后在小鼠体内的分布
3.3结果
3.3.1 Tso118目的基因的制备
3.3.2 pYA3341-Tso118重组质粒的鉴定
3.3.3 Tso118重组蛋白的表达及Westren blot分析
3.3.3 Tso118重组蛋白的Westren blot分析
3.3.4重组菌X4550(pYA3341-Tso118)的体外稳定性
3.3.5重组菌生长曲线的测定
3.3.6重组菌的安全性实验
3.3.7重组疫苗株口服免疫后在小鼠体内的分布
3.4讨论
第四章 重组疫苗菌X4550(pYA3341-Tso118)的免疫学研究
4.1实验材料
4.1.1菌种和质粒
4.1.2实验动物
4.1.3主要试剂和耗材
4.1.4培养液
4.1.5溶液的配制
4.1.6重组菌X4550(pYA3341-Tso118)和X4550(pYA3341)的大量制备
4.2小鼠免疫实验
4.2.1实验小鼠分组
4.2.2实验小鼠免疫
4.2.3免疫小鼠血清的收集
4.2.4免疫小鼠肠道分泌性抗Tso118 IgA抗体的测定
4.2.5免疫小鼠抗Tso118抗体的检测
4.2.6免疫小鼠脾脏T淋巴细胞亚群的测定
4.3猪免疫实验
4.3.1重组菌X4550(pYA3341-Tso118)和X4550(pYA3341)的大量制备
4.3.2实验动物的分组与口服接种
4.3.3实验猪血清抗体的检测
4.4实验结果
4.4.1 ELISA最佳条件的选择
4.4.2免疫小鼠血清抗Tso118抗体的检测
4.4.3免疫小鼠脾脏T淋巴细胞亚群的测定
4.4.4实验猪血清抗体的检测
4.5讨论
4.5.1寄生虫免疫逃避机制
4.5.2粘膜免疫
4.5.3粘膜免疫的优点
4.5.4小鼠免疫实验分析
4.5.5猪免疫实验分析
第五章全文结论
第六章文献综述 减毒沙门氏菌作为口服疫苗活载体的研究进展
6.1沙门氏菌减毒的相关基因
6.1.1控制芳香族化合物生物合成的aro基因
6.1.2影响碳水化合物利用途径的galE基因
6.1.3 pur系列基因
6.1.4 asd基因
6.1.5 htrA基因
6.1.6 cya、crp基因
6.2减毒沙门氏菌载体激发的免疫应答
6.3载体减毒沙门氏表达系统的构建
6.3.1质粒表达系统
6.3.2染色体整合系统
6.3.3载体-宿主平衡致死系统
6.4沙门氏菌进入机体免疫系统的机制
6.4.1沙门氏菌通过粘膜上皮M细胞进入机体
6.4.2沙门氏菌被树突细胞直接从肠腔摄取进入机体
6.5减毒沙门氏菌的应用
6.5.1常用的减毒沙门氏菌菌株
6.5.2携带DNA疫苗的重组减毒沙门氏菌的应用
6.5.3表达外源抗原的重组减毒沙门氏菌疫苗的应用
6.6减毒沙门氏菌载体疫苗的优越性
6.6.1抗原呈递的有效性
6.6.2细菌载体的佐剂作用
6.6.3细菌CpG序列
6.6.4激发粘膜免疫
6.6.5减毒沙门氏菌运载效应易于强化
6.6.6免疫具有持续性
6.6.7抗原不需提纯
6.6.8应用方便
6.7潜在的危险性
6.7.1弱毒细菌的危险性
6.7.2质粒DNA的危险性
参考文献
附录
致谢
作者简历