阿司匹林与烟草提取物对食管鳞癌细胞株cyclinD表达及对细胞周期的影响

摘要

目的:探讨细胞周期蛋白D<,1>(cyclinD<,1>)在食管鳞癌细胞株EC109的表达情况，检测COX-2抑制剂阿司匹林及烟草提取物作用前后cyclinD<,1>蛋白水平及细胞周期的变化。 方法:应用不同浓度的阿司匹林及烟草提取物(CE)作用于EC109细胞48小时后，采用MTT法检测细胞活性变化及活细胞数目；应用RT-PCR方法检测EC109细胞cyclinD<,1>基因表达水平：应用Western blot方法检测作用前后cyclinD<,1>蛋白表达水平的变化；应用PI单染流式细胞仪(FCM)技术检测不同浓度阿司匹林及CE作用前后细胞周期的变化。 噻唑蓝法：将细胞种植于96孔板培养24小时，然后加入不同浓度的阿司匹林及烟草提取物CE，孵育48小时，最后加入噻唑蓝并进行吸光度检测。 逆转录聚合酶链反应法(RT-PCR)：从细胞提取总RNA，并用2μg总RNA逆转录成cDNA。然后将2μl cDNA加入PCR扩增体系进行扩增，最后将PCR产物在琼脂糖凝胶中电泳并进行检测。 Westernblot方法：从细胞提取总蛋白，上样电泳、转膜后经5﹪脱脂奶粉封闭、一抗、二抗孵育后行化学发光法鉴定蛋白表达情况。 碘化丙锭(PI)单染法：收集细胞并清洗，调节细胞浓度，计数1×106个细胞，PBC重悬细胞，先后加入RNA酶及PI，各孵育30min，流式细胞仪检测。 结论: (1)阿司匹林可抑制EC109细胞的增殖，在一定范围内呈浓度依赖性特点，其机制可能为通过使cyclinD<,1>表达下调，从而阻止细胞由G<,0>/G<,1>期向S期的过渡来实现的。 (2)烟草提取物CE可促进EC109细胞的增殖，在一定范围内呈浓度依赖性特点。随CE药物浓度的增加，cyclinD<,1>的表达逐渐上调；CE促进细胞周期的转化，使细胞加快通过G<,0>/G<,1>期，S期和G<,2>/M期细胞比例逐渐增加。 (3)阿司匹林可抑制烟草提取物的促细胞增殖作用。随着阿司匹林浓度的递增其对细胞增殖的抑制作用逐渐增强，且阿司匹林可抑制CE促进cyclinD<,1>蛋白表达的作用。促进细胞跨过G<,0>/G<,1>期，发生S期阻滞。

目录

首都医科大学学位论文原创性声明及版权使用授权书

摘要

前言

材料与方法

第一部分阿司匹林及烟草提取物对CE109细胞株的增殖和抑制的影响

第二部分阿司匹林及烟草提取物作用于EC109细胞后cyclinD1的mRNA及蛋白表达情况

第三部分阿司匹林及烟草提取物作用于EC109细胞后细胞周期的变化

讨论

结论

参考文献

文献综述阿司匹林及烟草提取物与食管癌cyclinD1表达关系的研究进展

攻读学位期间发表文章情况

致谢

个人简历