T细胞受体CDR3δ移植性抗体（OT3）—免疫毒素的抗肿瘤研究及CDR3δ多肽的构象研究

摘要

缺乏特异性肿瘤抗原是实体肿瘤抗体免疫治疗效果欠佳的重要原因；而γδT细胞能够经由其细胞受体(γδTCR)6链的CDR3区(CDR3δ)广泛地识别、进而杀伤多种实体肿瘤细胞，比如卵巢癌。本试验将抗体分子重链的CDR3(CDR3H)用CDR3δ替换以获得γδT细胞的肿瘤识别能力，探索潜在的癌症治疗应用。本文首先用将CDR3H被替换为CDR3δ的IgG重链表达载体转染重链缺失型J558L骨髓瘤细胞，表达了抗体OT3Ab，其CDR3δ序列为本组报道的源自卵巢癌浸润Vδ2T细胞的OT3序列。经SDS-PAGE和WesternBlotting验证后，流式细胞术分析显示OT3Ab能够和卵巢癌细胞系SKOV3特异结合(57.1％，CDR3未替换的对照抗体4.42％)，核素99mTc标记OT3Ab后对接种SKOV3细胞的荷瘤裸鼠体内显像结果表明，OT3Ab能够特异聚集于肿瘤组织。随后本试验把OT3Ab和白喉毒素通过化学偶联的方法构建免疫毒素OT3AbDT，经免疫荧光显示其结合肿瘤细胞能力依然保存后，进行体内外抗肿瘤的试验治疗。蛋白合成抑制试验显示OT3AbDT对SKOV3细胞的IC50介于1-10μg/ml。在SKOV3皮下荷瘤裸鼠模型中，瘤内注射OT3AbDT(13.8μg/次，每4天1次，共4次)，荷瘤小鼠的肿瘤在16天后显著减小，和PBS差异显著。在更多种类的肿瘤皮下荷瘤模型中，包括人宫颈癌细胞系Hela、肝癌HepG2和直肠癌HR8348，尾静脉注射的OT3AbDT(13.8μg/次)也表现出不同程度的肿瘤体积增长被抑制的效果。上述结果表明CDR3δ移植性抗体为肿瘤的靶向免疫治疗提供了新的策略和工具。同时，本文也通过圆二色谱、分子动力学模拟对CDR3δ多肽的构象进行研究，为针对CDR3δ肽的研究提供必要的结构信息。

目录

文摘

英文文摘

论文说明：英文缩略词表

前言

第一部分T细胞受体CDR3δ移植性抗体(OT3)-免疫毒素的抗肿瘤研究

一、材料与方法

二、结果

三、讨论

四、小结

参考文献

第二部分OT3和ch1 CDR3δ肽的构象分析

一、材料和方法

二、结果

三、讨论

四、小结

参考文献

结论

γδT细胞研究进展

附录

个人简历

致谢