抗髓鞘少突胶质细胞糖蛋白抗体测定方法建立及临床意义

摘要

目的： 采用分子克隆技术制备高纯度的髓鞘少突胶质细胞糖蛋白(myelin oligodendroglia glycoprotein， MOG)；建立以放射免疫分析技术(radioimmunoassay，RIA)测定血清抗MOG抗体的新方法；初步探讨抗MOG抗体与MS诊断的相关性。 方法： 1、采用分子克隆技术诱导表达MOGIgd融合蛋白，并通过金属螯合亲和层析法进行纯化。 2、建立测定血清抗MOG抗体的RIA方法，并应用于动物实验。以Iodogen为氧化剂，使用Na125I标记MOGIgd融合蛋白，经Sephadex-G25凝胶层析过滤，获得高纯度的125I-MOGIgd融合蛋白。将48只C57BL/6小鼠随机分为4组。MOG组：用MOGIgd融合蛋白与完全弗氏佐剂(CFA)的混合抗原乳剂免疫小鼠；TrxA组：用硫氧还蛋白(TrxA)与CFA的混合乳剂免疫小鼠；GPSCH组：用豚鼠脊髓匀浆(GPSCH)和CFA的混合乳剂免疫小鼠；NC组：用生理盐水和CFA的混合乳剂免疫小鼠。双盲法观察小鼠，并记录神经功能评分。各组动物观察30天后处死，同时采集小鼠血清标本。将125I-_MOGIgd融合蛋白与各组小鼠血清标本结合，孵育过夜后与兔抗鼠IgG结合，收集沉淀，用γ放射性检测仪测定抗MOG抗体水平。 3、测定分析患者血清抗MOG抗体水平。收集23例MS(MS组)、57例临床孤立综合征(CIS组)、41例其他炎症性神经系统疾病(OIND组)及37例非炎症性神经系统疾病(ONND组)患者的血清和脑脊液。将125I-MPGIgd融合蛋白与各组患者血清和脑脊液结合，孵育过夜后与羊抗人IgG结合，收集沉淀后用γ放射性检测仪测定抗MOG抗体水平。应用Image pro plus6.0软件测定中枢神经脱髓鞘患者(包括MS组和CIS组)MRI资料的病灶负荷(BOD)，然后与患者血清中抗MOG抗体水平作相关性分析。应用单向免疫扩散方法检测各组患者血清和脑脊液的IgG和白蛋白浓度，并计算脑脊液IgG指数(IgG index)、24小时IgG合成率(IgG-syn)及白蛋白商(Qalb)。通过绘制受试者工作特征曲线(ROC曲线)，比较血清抗MOG抗体水平、脑脊液IgG index、IgG-syn及Qalb等参数对MS诊断的敏感性和特异性。 结果： 1)经分子克隆技术诱导表达纯化后，获得分子量为32KD的MOGIgd融合蛋白，最终蛋白浓度为2.91mg/ml。 2)成功制备纯度较高的125I-MOGIgd融合蛋白，标记率为48.4％，比放射性为320043 Bq/μg。应用新型放射免疫法测定各组小鼠血清抗MOG抗体，MOG组血清抗MOG抗体水平(4886±381)cpm高于GPSCH组(2071±384)cpm、TrxA组(4391±167)cpm及正常对照组(1747±215)cpm(P<0.01)。 3)MS组患者血清中抗MOG抗体的水平(3324±574)cpm明显高于与CIS组(2913±570)cpm、OIND组(2651±383)cpm和ONND组(2678±430)cpm，统计学有显著差异(P<0.01)。MS组患者血清抗MOG抗体阳性率(47.8％)明显高于其他组别，CIS组(17.85％)、OIND组(9.8％)及ONND组(2.7％)。MS组活动期血清抗MOG抗体的水平及阳性率高于缓解期期，且有统计学差异(P<0.05)。中枢脱髓鞘病交(MS和CIS)患者MRI显示的病灶负荷(BOD)与其血清抗MOG抗体水平呈正相关(P<0.01)。抗MOG抗体的ROC曲线下面积(AUC)为0.78(P<0.01)，高于脑脊液IgG指数(0.58)(P=0.286)、24小时IgG合成率(0.68)(P=0.035)和白蛋白商(0.564)(P=0.651)。 结论： (1)制备高纯度的MOGIgd融合蛋白。 (2)建立了一种较为敏感的测定血清抗MOG抗体的放射免疫方法。 (3)血清抗MOG抗体对MS有一定的诊断价值。

目录

文摘

英文文摘

论文说明：缩略词表

声明

前言

第一章：MOG Igd 融合蛋白的原核表达、纯化及鉴定

材料和方法

结果

讨论

结论

第二章 建立测定血清抗MOG抗体的RIA法

材料和方法

结果

讨论

结论

第三章 测定患者血清抗MOG抗体水平的意义

材料和方法

结果

讨论

结论

参考文献

致谢

附录

测定少突胶质细胞糖蛋白自身抗体的方法比较（综述）