乌司他丁对GalN/LPS引起大鼠急性肝衰竭Caspase-3、Caspase-8和Bcl-2的影响

摘要

目的： 1.观察乌司他丁(UTI)对D-氨基半乳糖(D-GalN)/脂多糖(LPS)引起大鼠急性肝衰竭预后的影响。 2.初步研究乌司他丁对Caspase-3、Caspase-8活性和Bcl-2表达的影响，探讨肝细胞凋亡与急性肝衰竭的关系以及乌司他丁对其预后的相关性。 方法： 1.动物分组与喂养：健康雄性Sprague-Dawley系大鼠186只，体重200～250g，随机分为对照组，模型组和UTI处理组，模型组和UTI处理组再分为6h、12h、24h、36h、48h取材5组。另模型组和UTI处理组中各取15只大鼠观察生存率和生存时间所有大鼠均在室温恒定(20-25℃)及灯光昼夜节律控制(8：00-20：00)下喂养，自由进食、进水，实验前12h开始禁食。 2.大鼠急性肝衰竭模型的建立：腹腔内注射D-GalN/ LPS建立大鼠急性肝衰竭模型，UTI处理组则在腹腔内注射D-GalN/ LPS后立即注射UTI，模型组则在腹腔内注射D-GalN/ LPS后立即注射0.4ml生理盐水。正常对照组则腹腔注射2ml生理盐水。 3.取材与切片：在相应时间点处死各组大鼠，先用10％水合氯醛0.35ml/kg麻醉，剖腹经门静脉采血，取出肝组织立即置于用中性福尔马林固定12h，之后脱水透明石蜡包埋。另取部分肝组织立即液氮冻存。 4.标本检测：经门静脉所采血标本，全自动生化仪检测血清丙氨酸转氨酶(ALT)、天冬氨酸转氨酶(AST)，ELISA法检测肿瘤坏死因子α(TNF-α)。肝组织切片HE染色观察肝脏病理形态学变化；取肝组织匀浆检测Caspase-3和Caspase-8活性。采用S-P免疫组织化学方法染色组织切片，检测Bcl-2在肝组织中的表达。 结果： 1.在用D-GalN/ LPS造模后，大鼠逐渐表现为食欲明显减退、嗜睡、抽搐、昏迷等。肝病理学表现为肝小叶结构被破坏，可见不同程度的细胞凋亡及坏死，小叶内及汇管区有淋巴细胞和巨噬细胞为主的炎症细胞浸润，残存肝细胞水肿变性，这表明急性肝功能衰竭动物模型成功建立。 2.UTI处理组血清ALT、AST、TB水平明显降低， ALT在12h，24h，36h，48h与模型组相比差异有统计学意义(P<0.01)。AST在12h，24h，36h，48h与模型组相比差异有统计学意义(P<0.01)。TB在24，36h，48h与模型组相比差异有统计学意义(P<0.05或P<0.01)。 3.UTI处理组血清TNF-α水平明显降低，TNF-α水平在6h和12h与模型组相比差异有统计学意义(P<0.01或P<0.05)。 4.UTI处理组Caspase-3和Caspase-8活性明显降低，Caspase-3活性在各时间点与模型组相比均有统计学意义(P<0.01)。Caspase-8活性亦在各时间点与模型组相比有统计学意义(P<0.01)。 5.UTI处理组Bcl-2表达明显增加，Bcl-2蛋白表达在6h时已经明显增加，与模型组相比有统计学意义(P<0.05)，其他各时间点与模型组相比均有统计学意义。 6.UTI处理组大鼠生存率明显提高，UTI处理组和模型组大鼠生存率分别是66.7％(10/15)、40.0％(6/15)，UTI处理组较模型组大鼠生存率有显著性提高(P≤0.05)。 结论： 1.乌司他丁能改善急性肝衰竭大鼠的肝脏病理组织学结构，改善肝衰竭大鼠的肝功能。 2.乌司他丁能提高急性肝衰竭大鼠的生存率，其机制可能与降低急性肝衰竭大鼠血清TNF-α水平，降低肝组织Caspase-3和Caspase-8活性，增加抗凋亡蛋白Bcl-2的表达有关。

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Caspase在肝衰竭中的作用