白藜芦醇抗衰老抗氧化试验及其相关机理研究

摘要

白藜芦醇（resveratrol，RES）是一种存在于葡萄、花生以及虎杖等植物中的天然多酚，适度的饮用红酒有助于降低人类的心血管疾病发生几率。现有研究表明RES具有抗肿瘤、抗炎症、免疫调节、抗氧化、抗心血管疾病等广泛的药理活性。本论文分别以秀丽线虫和昆明种小鼠为研究对象，对RES的抗衰老与抗氧化的功效及其分子机制进行了初步研究。
　　 首先探究了RES对模式生物秀丽线虫寿命及相关基因表达的影响。设定50mg/L、100mg/L为RES终浓度，观察正常生存温度25℃和热应激温度35℃下两浓度RES对秀丽线虫寿命的影响，以与衰老相关的daf-16、sod-3、hsp-16.2三个基因探究RES对秀丽线虫寿命影响的分子机制。结果表明，100mg/LRES能显著(P＜0.05)延长正常及热应激条件下线虫的寿命，基因表达分析表明，daf-16、sod-3、hsp-16.2基因均明显上调，证明RES确实具有延缓活体动物衰老的功效，上述三个基因可能参与该过程的调节。
　　 然后建立了昆明种小鼠的高血脂模型，探究了RES抗脂质过氧化能力及相关通路的基因表达差异。设定模型组、高（60mg/Kg/day）、中（30mg/Kg/day）、低（10mg/Kg/day）剂量RES组、阳性对照组（脂比妥—降脂药物）以及空白对照组，通过检测各组血清TC、TG、HDL-C和LDL-C水平来评价模型建立是否成功，检测肝脏SOD和MDA来评价机体抗氧化能力和脂质氧化水平。以脂质代谢通路中的ACC1，CYP7A1和CPT-1表达差异评价RES对脂质代谢调节机制的影响，以肝SOD-3基因表达的差异评价其对抗氧化机制的影响。结果表明，不同剂量的RES能明显降低血清内TG、LDL-C和TC含量，高剂量的影响最为显著(P＜0.05)，基因表达分析表明可能与其上调ACC1和CYP7A1，下调CPT-1有关;RES能显著提高小鼠肝脏内SOD水平，降低MDA浓度，其中以高剂量组影响最为显著(P＜0.01)，表明RES具有抗氧化能力，基因表达分析表明其作用机理可能与其上调SOD-3的基因表达有关。

目录

声明

摘要

1 前言

1．1 白藜芦醇的概述

1．1．1 白藜芦醇的性质及特点

1．1．2 白藜芦醇的主要功能

1．2 秀丽线虫(Caenorhabditis elegans)介绍

1．2．1 秀丽线虫生物学特性

1．2．2 秀丽线虫作为模式生物的发展史及研究进展

1．2．3 秀丽线虫作为衰老研究模式生物的优势

1．3 衰老概述

1．3．1 衰老概念

1．3．2 衰老的分子机制

1．3．3 衰老的研究进展

1．3．4 衰老相关基因与寿命

1．4 抗脂质氧化的研究

1．4．1 脂质代谢通路

1．4．2 脂质氧化相关基因研究进展

1．5 本课题的研究内容与目的意义

1．5．1 本论文的研究内容

1．5．2 本论文的研究目的与意义

2 材料与方法

2．1 实验材料与仪器

2．1．1 实验材料

2．1．2 主要试剂

2．1．3 实验仪器

2．1．4 溶液及培养基

2．2 实验方法

2．2．1 白藜芦醇的环糊精包埋

2．2．2 线虫实验

2．2．3 小鼠实验

2．2．4 基因的表达分析

2．2．5 数据处理工具与统计方法

3 结果与讨论

3．1 不同浓度白藜芦醇对线虫寿命影响作用

3．1．1 正常培养条件下(25℃)不同浓度白藜芦醇对线虫寿命影响作用

3．1．2 热应激条件下(35℃)不同浓度白藜芦醇对线虫寿命影响作用

3．2 与线虫寿命相关的基因表达分析

3．2．1 线虫RNA的提取

3．2．2 RT-PCR扩增目的基因及相关分析

3．3 小鼠生理生化指标

3．3．1 最后体重，肝脾肾指数

3．3．2 SOD和MDA检测结果

3．3．3 血脂检测结果

3．4 分子机制实验结果

3．4．1 RNA样品检测结果

3．4．2 半定量RT-PCR产物电泳检测结果

4 结论

5 展望

参考文献

7 攻读硕士学位期间发表论文情况

致谢

附录