前列腺素E对胆管上皮癌HuCCT1和CCLP细胞增殖的影响及其机制

摘要

环加氧酶-2(COX-2)及其产物前列腺素E<,2>(PGE<,2>)在细胞增殖中的作用一直受到人们的关注，在许多肿瘤组织中都有COX-2/PGE<,2>的高表达现象，但PGE<,2>影响肿瘤细胞生长的作用机理目前还不十分清楚。PGE<,2>是COX-2的主要产物，通过刺激诱导肿瘤血管增生，抑制局部免疫功能，调节多种信号传导途径而影响细胞的增殖，促进肿瘤细胞的生长。因此研究PGE<,2>的细胞内信号转导通路以及PGE<,2>影响肿瘤细胞生长的机制可为防治肿瘤提供重要的依据。本实验探讨PGE<,2>对胆管上皮癌细胞HuCCT1和CCLP增殖的影响，并初步探讨了PGE<,2>促进胆管上皮癌细胞生长的机制，为进一步研究PGE<,2>影响肿瘤细胞生长的机制提供一定的基础。 研究目的：探讨前列腺素E<,2>(prostaglandin E<,2>，PGE<,2>)对胆管上皮癌细胞HuCCT1和CCLP增殖的影响及其可能机制。 研究方法：1.细胞培养：HuCCT1和CCLP胆管上皮癌细胞分别培养于DMEM和RPMI-1640培养基中。2.细胞生长和活性测定(WST-1)实验检测PGE<,2>对胆管上皮癌细胞增殖的影响。3.Fluo-3/AM荧光负载胆管上皮癌细胞，激光扫描共聚焦显微镜检测外源PGE<,2>对细胞内钙离子浓度的影响。4.酶联免疫法测定胆管上皮癌细胞内环磷酸腺苷(cyclic adenosine monophosphate，cAMP)的浓度。5.PGE<,2>、forskolin和BAPTA-AM处理胆管上皮癌细胞，并制作细胞爬片，进行荧光免疫细胞化学实验，于荧光显微镜下观察p-CREB的表达和定位。6.PGE<,2>、forskolin和BAPTA-AM处理胆管上皮癌细胞，提取蛋白，Western Blot检测胆管上皮癌细胞中p-CREB蛋白的表达情况。7.收集江苏省人民医院胆管癌6例，免疫组化法检测胆管癌组织中p-CREB蛋白的表达情况。 研究结果：1.细胞生长和活性测定(WST-1)实验显示1μmol/L、5μmol/L、10μmol/L和20μmol/L PGE<,2>可促进胆管上皮癌细胞HuCCT1生长，肿瘤细胞生长率分别为105.36％、112.45％、120.73％和128.21％，CCLP细胞结果与此类似。2.10μmol/L PGE<,2>可引起HuCCT1细胞荧光值发生动态变化，荧光值平均增加约50％，表明PGE<,2>可增高HuCCT1细胞内钙离子浓度，CCLP细胞结果与此类似。 3.PGE<,2>可增高HuCCT1细胞内cAMP浓度，0.1μmol/L、1μmol/L和10μmol/L PGE<,2>作用细胞时，细胞内cAMP浓度分别为183.94pmol/L、189.01 pmol/L和202.12 pmol/L，CCLP细胞结果与此类似。4.荧光免疫细胞化学实验结果表明：p-CREB定位于HuCCT1和CCLP肿瘤细胞核，PGE<,2>和forskolin可以使CREB蛋白磷酸化水平增高，而BAPTA.AM则抑制CREB蛋白的磷酸化。5.Westem Blot实验结果与荧光免疫细胞化学实验结果一致，PGE<,2>和forskolin可以使CREB蛋白磷酸化水平增高，而BAPTA-AM则抑制CREB蛋白的磷酸化。6.免疫组化实验结果表明，人胆管癌组织中有较强的p-CREB蛋白表达。 研究结论：胆管上皮癌细胞HuCCT1和CCLP经PGE<,2>处理后可见细胞内Ca<'2+>和cAMOP浓度增高、CREB蛋白的磷酸化水平增高。表明PGE<,2>可能通过Ca<'2+>、cAMP/p-CREB信号通路促进胆管上皮癌细胞生长。

目录

声明

前言

材料与方法

结果

讨论

参考文献

研究小结

致谢

前列腺素E2与肿瘤