NF-κB抑制剂PDTC对人胃癌SGC-7901细胞凋亡及Livin和Caspase-3表达的影响

摘要

背景和目的：胃癌是我国最常见的恶性肿瘤之一，大部分胃癌患者被发现时已处中晚期，手术往往难以根治，而包括化疗在内的疗效目前尚不能令人满意，究其原因是多方面的，其中肿瘤细胞凋亡机制异常引起的凋亡抵抗被认为是对化疗药物不敏感的重要原因。因此从凋亡异常的发生机制着手，寻找逆转胃癌细胞凋亡抵抗的靶点成为当前研究的热点之一。IAP家族因在凋亡抵抗中可能起重要作用而日益受到重视，Livin是这个家族中的新成员，主要在肿瘤细胞中高表达，其表达水平的增高可导致肿瘤对化疗的敏感性下降。因此抑制Livin在肿瘤细胞中的表达，恢复肿瘤细胞对凋亡的敏感性，可能会提高肿瘤临床治疗的效果。 NF-κB 作为一作用广泛的转录因子，它不仅参与机体的免疫应答、炎症反应，而且在肿瘤的发生和发展过程中起重要作用。现在发现，NF-κB激活后可上调IAP家族中CIAP1和CIAP2等分子的表达，抑制细胞凋亡的进程，但目前它的激活与Livin表达之间的关系尚不清楚，因此抑制N F-κB活化可望成为肿瘤治疗的一个新策略。 本研究观察了在NF-κB抑制剂PDTC诱导胃癌细胞发生凋亡的过程中，NF-κB活性抑制后，Livin和caspase-3表达水平的变化，探讨Livin在NF-κB抗凋亡途径中可能发挥的作用。 方法：以不同浓度(50、100、150、200mmol/L)PDTC作用于SGC-7901胃癌细胞不同时间(24h，48h，72h)后，(1)采用MTT法测定其对SGC-7901细胞增殖的抑制率；(2)采用流式细胞仪测定SGC-7901细胞的凋亡情况；(3)采用real time PCR法检测SGC-7901细胞Livin和caspase-3 mRNA的表达情况；(4)采用Western blot法检测SGC-7901细胞Livin和caspase-3蛋白的表达情况。 结果：(1)不同浓度PDTC作用不同时间后对SGC-7901细胞生长有明显抑制作用，并呈剂量、时间依赖性。(2)流式细胞仪的结果显示，50、100、150和200mmol/L PDTC作用48h后的凋亡率分别为9.37±0.23％、16.58±1.26％、22.15±1.84％、31.47±2.01％，与对照组2.04±0.03％相比，差异有显著性，且各浓度组之间差异均有显著性(P<0.001)。100mmol/L PDTC作用24、48和72h后的凋亡率分别为10.25±1.36％、16.58±1.47％、23.66±1.95％，与对照组1.09±0.01％相比，差异有显著性，且各时间组之间差异也均有显著性(P<0.001)。(3)real time PCR和Western blot法分析同时显示，PDTC作用于SGC-7901细胞后可降低Livin mRNA及蛋白的表达，增加caspase-3mRNA及蛋白的表达，呈现剂量、时间依赖性。且Livin的表达与PDTC的作用以及胃癌细胞凋亡率呈剂量、时间负相关，其相关系数分别为84.5％，95.1％和84.1％，87.6％；与caspase-3的表达也呈剂量、时间负相关，其相关系数为97.7％，99.6％。 结论：(1)PDTC通过抑制NF-κB的活性诱导胃癌细胞SGC-7901凋亡，表明阻断NF-κB信号通路在抗肿瘤治疗中具有重要性。(2)PDTC作用后，Livin表达下调，caspase-3激活可能与NT-κB活性受抑制有关，提示Livin的表达受到NF-κB活化状态的调控。

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致 谢

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