人参锈腐菌颉颃放线菌发酵条件及抗生素分离提取

摘要

本文主要针对人参锈病菌，对本实验室现有的七个放线菌株进行筛选，选出一株抑菌效果较好的菌株1A，然后从抑菌活性测定、发酵条件优化、活性组分提取、粗品理化性质及活性成分官能团的分析进行了研究，结果如下： 通过平板对峙培养法和抑菌圈法，对7个放线菌菌株进行了初筛和复筛，结果表明有6个菌株对人参锈腐菌具有颉颃作用，其中菌株1A的抑菌活性最好。菌株1A的发酵液对人参锈腐菌(Cylindrocarpon destructans)、禾谷镰刀菌(Fusarium graminearum)、稻瘟病菌(Pyricularia grisea)、玉米弯孢菌(Curvularia lunata)、玉米大斑病菌(Exerohilum turcicum)、烟草赤星病菌(Alternaria alternata)、黄瓜黑星病菌(Cladosporium cucumerinum)、蕃茄炭疽病菌(Colletotrichum coccldes)、禾草离蠕孢菌(Bipolaris sorokiniana)均有较好的抑制作用。 比较了7种发酵培养基对菌株1A产素的影响，初步确定适合的培养基G；对菌株1A发酵条件的进行了研究，结果表明玉米粉和葡萄糖、大豆粉和酵母粉复合使用是菌株1A发酵的最佳碳源和氮源；加入无机盐，可以促进菌株1A产素。通过正交试验明确了最优的发酵培养基配方为玉米粉3(％)，葡萄糖1(％)，大豆粉2(％)，酵母粉0.3(％)，KH2PO40.1(％)，CaCO30.3(％)，NaCl0.1(％)，最佳培养条件为种龄28h、接种量6％、装液量为30mL/250mL三角瓶，发酵周期60h、摇床转速200rpm、发酵温度28℃、pH7。 对菌株1A发酵液的预处理方法-酸处理法和有机溶剂处理法进行了比较，结果表明，有机溶剂处理法不仅沉淀较为完全，而且有效成分的活性丧失比率小，因此将有机溶剂沉淀法做为本试验的预处理方法。采用溶媒萃取法，收集其有机相，通过减压浓缩，除去有机溶剂，得到黄色的粗品(暂定名为TS08)。比较粗品氯仿饱和溶液与原发酵液抑菌活性，结果表明，粗品活性受外界条件影响较小。 TS08对紫外、高温、低温都具有很好的稳定性，层析试验结果表明TS08中的活性成分为中性物质，水溶性强，并且极性较大。利用显色反应判断该活性成分中可能含有不饱和键。采用特征性官能团反证法，研究结果表明该活性成分不是氨基酸、多肽或蛋白质，可能是糖或糖苷。

目录

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引言

第一章文献综述

1.1关于人参锈腐病

1.1.1农业防治

1.2.1生物防治

1.2抗生素产生的背景

1.3农用抗生素发展历程

1.4我国农用抗生素的发展状况

1.5农用抗生素的作用机制

1.5.1作用于细胞壁

1.5.2作用于细胞膜

1.5.3作用于蛋白质合成系统

1.5.4作用于能量代谢系统

1.5.5抑制核酸合成

1.5.6通过提高植物的抗病力而防治病害

1.6农用抗生素研究开发的意义

1.7抗生素研究现状

1.7.1菌种方面

1.7.2发酵

1.7.3提炼即分离纯化工艺

第二章抗生素高产菌株筛选

2.1试验材料

2.1.1菌株来源

2.1. 2供试病原菌

2.1.3供试培养基

2.2试验方法

2.2.1菌株单孢分离

2.2.2菌株的抑菌活性测定

2.3试验结果

2.3.1菌株的选育

2.3.2菌株的抑菌活性测定

第三章　菌株1A发酵条件研究

3.1试验材料

3.1.1供试菌株

3.1.2供试病原菌

3.1.3供试培养基

3.1.4主要供试器材

3.2试验方法

3.2.1不同发酵液对1A产素的影响

3.2.2不同碳源对菌株1A产素的影响

3.2.3不同氮源对菌株1A产素的影响

3.2.4营养条件单因子试验

3.2.5碳氮源正交试验

3.2.6无机盐正交试验

3.2.7发酵条件研究

3.2.8原始发酵培养基配方与最优培养基配方的比较试验

3.3试验结果

3.3.1不同发酵液对菌株1A产素的影响

3.3.2不同碳源对菌株1A产素的影响

3.3.3不同氮源对菌株1A产素的影响

3.3.4营养条件单因子试验

3.3.5碳氮源正交设计试验

3.3.6无机盐正交设计试验

3.3.7原始发酵培养基配方与最优培养基配方的比较试验

3.4发酵条件研究

3.4.1摇瓶装量实验

3.4.2种龄试验

3.4.3接种量试验

3.4.4发酵温度试验

3.4.5初始pH试验

3.4.6发酵时间试验

3.4.7摇床转速试验

3.4.8发酵正交试验

第四章菌株1A所产抗生素分离提取及结构初探

4.1供试材料

4.1.1供试菌株和供试病原菌

4.1.2主要仪器及主要试剂

4.1.3供试培养基

4.2试验方法

4.2.1菌株1A所产抗生素的粗提

4.2.2粗品TS08的特性初探

4.3试验结果

4.3.1菌株1A所产抗生素的粗提

4.3.2抗生素TS08的特性初探

第五章结论与讨论

5.1结论

5.1.1高产菌株选育及对其它病原菌抑菌活性测定

5.1.2菌株1A摇瓶发酵条件初探

5.1.3粗品性质初探

5.1.4纸层析、硅胶薄层层析

5.2讨论

5.2.1高产菌株筛选

5.2.2菌株1A发酵条件研究

5.2.3菌株1A所产抗生素的提取

5.2.4粗品TS08特性初探

5.2.5菌株1A菌发酵产特征官能团反应

5.2.6菌株1A发酵产物的田间防治效果

参考文献

致谢

作者简历