人参锈腐病颉颃放线菌的筛选及鉴定

摘要

本研究于2006年至2007年，从吉林省的通化市、靖宇县和长白县三地采集人参根际土样126份，从中分离出真菌39株、细菌68株、放线菌232株，对人参根际的放线菌、真菌、细菌数量的变化进行了研究。 研究结果表明，随着栽参年限的增加，人参根际土壤中微生物数量呈下降的趋势，其中新林土中的微生物数量最多，老参地中最少；新林土到1年与5年到老参地这两个时间段根际土壤中微生物数量降低幅度较大。随着深度的增加，土壤微生物数量呈下降的趋势，其中0～5cm与5～10cm土层间的降低幅度要高于5～10cm与10～15cm土层间；不同年限同一土层的土壤中，微生物数量不完全遵循下降的趋势。 对分离出的39株真菌、68株细菌、232株放线菌与人参锈腐病菌进行了颉颃试验，结果表明，39株真菌对人参锈腐病菌完全没有颉颃作用；68株细菌中仅有3株有颉颃作用，但是作用不大且效果很不稳定；232株放线菌中筛选出颉颃效果较好的有9株，据此对这9株放线菌进行再次筛选。对这9株放线菌进行液体培养，取其发酵液对锈腐病菌进行颉颃试验，计算抑菌率，从中选出颉颃效果最好的菌株MS32，颉颃带宽度为11mm，抑菌率为76.45％。 对菌株MS32的液体培养条件进行了初步研究，主要研究培养基、温度、pH和培养时间对其发酵液抑菌效果的影响；并在此基础上对培养条件进行4因素3水平正交试验，最终确定了MS32的最适液体培养条件：培养基为玉米粉大豆粉培养基、温度为29℃，pH8，培养时间为120h。 对该株放线菌进行了形态学观察和部分生理生化反应的测定，并对16S rDNA序列进行了测定。形态学观察得出此株放线菌具有典型的链霉菌属的特征，证实其为链霉菌属。 生理生化反应测定结果为：菌株MS32使明胶液化，不产生H2S，牛奶不凝固胨化，淀粉水解，纤维素水解；可以利用D～葡萄糖、D-木糖、D-果糖、蔗糖、棉子糖、肌醇作为碳源。 对MS32的16S rDNA序列测定，其核苷酸序列长度为1250bp，将所测序列与从GenBank数据库中的同源性较高的32个链霉菌属放线菌序列进行比较，在系统进化树上菌株MS32与1个已知种Streptomyces naraensis（AB184691）部分16S rDNA序列98％相似，与另外2个菌株的的同源性也为98％，说明这4个菌株可能属于同一个种。

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文摘

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第一章前言

1.1人参根际微生物数量变化研究

1.2人参锈腐病的研究进展

1.3防治

1.4研究意义

第二章 人参根际微生物种群数量变化研究

2.1材料与方法

2.2结果与分析

2.3小结

第三章 人参锈腐病颉颃放线菌菌株的筛选及高效颉颃菌株MS32液体培养条件的研究

3.1材料与方法

3.2结果与分析

3.3小结

第四章颉颃菌株MS32的鉴定

4.1材料与方法

4.1.1试验材料

4.1.2试验方法

4.2结果与分析

4.2.1培养特征

4.2.2部分生理生化反应试验

4.2.3碳源利用试验

4.2.4分子鉴定结果

第五章结论与讨论

参考文献

致谢

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