1型糖尿病对兔心梗后心脏神经萌芽的影响及其作用机制初步探讨

摘要

目的： 观察T1DM 联合急性MI模型家兔心脏各个部位交感神经萌芽表达，并测定血清氧化应激指标浓度。探讨T1DM对兔MI后交感神经萌芽的影响；并初步探讨交感神经萌芽的发生机制，为临床更好的防治SCD提供理论基础和治疗策略。 方法： 1、实验动物选择及分组：40只健康家兔(体重1.9～2.8Kg)适应性饲养1周后随机分4组，分别为正常对照组(NC)组、单纯T1DM(DM)组、单纯MI(MI)组和T1DM和MI复合模型(DM+MI)组，全部动物均用普通饲料饲养。 2、动物模型制作：DM组和DM+MI组于分组后正式喂养1周末，禁食不禁水12小时后，按40mg/Kg耳缘静脉注射四氧嘧啶溶液，造T1DM模型；MI组和NC 组耳缘静脉注射相应体积的无菌柠檬酸-柠檬酸钠缓冲液(PH4.4)。MI组和DM+MI 组成模后第6周末开胸行心脏冠状动脉左前降支上段结扎术，造心梗模型。DM组和NC组以同样的方法行假手术。 3、动物处死及免疫组化：各组家兔于术后第1周末以耳缘静脉注静空气(约50ml)的方法处死。处死后立即于原切口处开胸，取出心脏；在显微镜下对HE染色的心肌组织切片进行组织学观察；用免疫组织化学方法检测心肌GAP-43和TH阳性的神经纤维，并用图像分析软件进行分析，计算出GAP-43和TH阳性神经纤维的相对密度。 4、血清检测：各组家兔分别于分组后第一周和术后处死前1天从耳缘静脉取血并分离出血清，冻存于-70℃超低温冰箱待测；采用氧化应激指标试剂盒子检测各组血清MDA、SOD的浓度和GSH-PX的活力。 结果： 1、MI组和NC组经喂养后体重稍增重，而DM组和DM+MI组成模后体重下降，于第8周末四组家兔的体重比较差异有统计学意义(P<0.01)。 2、经注射四氧嘧啶后DM组和DM+MI组家兔出现多饮、多尿等症状。10天后复查血糖，DM组和DM+MI组全部家兔空腹血糖值均在16.7mmol/L以上，而MI组和NC组血糖无明显变化。最终DM组成模9只，DM+MI组初步成模8只；MI组和DM+MI组各有7只家兔成功造模成功，手术成功率分别为87.5％和77.8％，两组相比较无统计学意义(P>0.05)。 3、MI后形态学改变和交感神经萌芽情况：HE染色显示术后一周，心肌细胞可出现灶状凝固性坏死及细胞空泡变性。NC组中GAP-43阳性和TH阳性的神经纤维呈非均态的分布，并且相同部位的切片显示，TH阳性神经与GAP-43阳性的神经部位存在重叠，提示为同一神经，显示萌芽的神经为主要是交感神经。 4、MI和T1DM对家兔心脏神经萌芽的影响：MI和T1DM对家兔心脏交感神经萌芽都有影响。MI使GAP-43和TH阳性的神经纤维密度增高，T1DM 使GAP-43 和 TH 阳性的神经纤维密度降低。两者存在交互作用，两者共同作用使DM+MI组的GAP-43和TH阳性的神经纤维密度明显高于MI组。 5、不同部位神经萌芽的比较：MI组不同部位GAP-43和TH阳性的神经纤维密度明显不同，其差异有显著的统计学意义(P<0.001)。组间两两比较显示，无论是GAP-43还是TH阳性的神经纤维密度均明显不同，并且其差异有统计学意义(P均<0.001)。GAP-43阳性的神经纤维密度的高低依次为：IBZ>SP>RV>IZ，TH阳性的神经纤维密度高低依次为：IBZ>SP>RV>IZ。 6、各组家兔氧化应激指标测定结果：与NC组相比较，DM组和MI组家兔血清。MDA浓度均明显增大(P均<0.001)，而血清SOD浓度及GSH-PX活力明显降低(P均<0.001)。MI和T1DM对血清MDA、SOD的值的影响存在交互作用，两者共同使血清MDA值升高，使SOD、GSH-PX值降低。 7、Pearson直线相关分析显示，术后一周DM+MI组家兔心脏IBZ的GAP-43阳性的神经密度与血清MDA的浓度呈明显的正相关，而与血清SOD、GSH-PX的值呈明显的负相关；而相同部位的TH阳性的神经密度与血清MDA的浓度呈明显的正相关，而与血清SOD、GSH-PX的值呈明显的负相关(P<0.05或P<0.01)。 结论： 1、MI和T1DM对家兔心脏交感神经萌芽均有影响。MI使MI后心脏交感神经萌芽增加，而DM使心脏出现去神经化和神经再生能力减弱。两者对家兔心脏神经萌芽影响存在交互作用，已存在的TIDM可使MI后心脏交感神经萌芽明显增强。 2、MI后心脏交感神经萌芽的发生可能与氧化应激有关，氧化应激可能在MI后交感神经萌芽的发生中起一定的作用。

目录

声明

1前言

1.1研究背景

1.2研究目的

1.3研究内容

2材料与方法

2.1实验材料

2.2实验方法

2.3统计分析

3结果

3.1各组家兔一般情况和DM造模结果

3.2各组家兔行心梗造模及假手术的情况

3.3术后1周各组心脏交感神经萌芽的情况

3.4各组家兔氧化应激指标测定结果

3.5术后1周各组氧化指标与神经萌芽程度的相关分析

4讨论

4.1家兔急性MI后神经形态学的改变和神经萌芽检测结果

4.2已存在的T1DM对MI后心脏神经萌芽的影响

4.3 MI后神经萌芽机制的初步探讨

4.4本研究的局限性

5小结

参考文献

文献综述 交感神经萌芽、电重构与心脏性猝死

致谢

附录