氨基葡萄糖及其制剂含量测定方法的研究

摘要

氨基葡萄糖盐酸盐和硫酸钾盐均为美国药典收载的品种。以美国药典收载的HPLC含量测定方法对D-氨基葡萄糖硫酸钾盐进行含量测定，发现含量明显偏高，而且对照液测定的重复性不好，因此对该标准方法的正确性和可靠性进行了验证。采用HPLC峰纯度检查以及降解试验等手段研究，发现色谱图中的主峰可能不是D-氨基葡萄糖峰，而是Cl-峰，而且在标准色谱条件下样品中有杂质峰与该主峰重叠，干扰样品的测定。 本文分别建立反相高效液相色谱衍生化法、紫外分光光度法、气相色谱法测定氨基葡萄糖盐酸盐和氨基葡萄糖硫酸盐及其制剂含量的方法。 反相高效液相色谱衍生化法：在三乙胺存在的碱性条件下，氨基葡萄糖溶液中加入芴甲氧羰酰琥珀酰亚胺(FMOC-OSu)进行衍生化反应，HPLC法采用岛津Shim-packVP-ODSC18(250mm×4.6mm，5μm)色谱柱，乙腈-磷酸盐缓冲液(pH2.5)(40:60)为流动相，梯度洗脱，流速1.0ml·min-1，在265nm波长处对衍生物进行检测，以氨基葡萄糖两个异构体峰面积之和进行定量分析，并对衍生化反应条件进行了考察。结果最适宜的衍生化反应条件为：FMOC-OSu溶液、三乙胺溶液浓度分别为0.4％、0.2％，水浴温度为60℃，反应时间为30min；氨基葡萄糖的线性范围为0.4～3.0mg·mL-1，四个样品的平均回收率分别为100.1％、99.9％、99.3％、100.0％。结论：该方法简便准确，专属性、重复性好，可用于氨基葡萄糖及其制剂的质量控制。 紫外分光光度法：在碳酸钠溶液环境下，氨基葡萄糖与铁氰化钾溶液反应，使铁氰化钾溶液的颜色变浅，反应后的溶液以空白试验溶液为参比，于420nm波长处测定吸光度，采用外标法定量测定。结果测定的最佳条件为：碳酸钠溶液和铁氰化钾溶液浓度分别为1.0mol·L-1、1.0mg·mL-1，反应时间为15分钟。氨基葡萄糖的线性范围为0.02～0.08mg·mL-1，四个样品的平均回收率分别为98.8％、99.8％、100.2％、99.5％。结论：该方法简便准确，重复性好，可用于氨基葡萄糖及其制剂的质量控制。 气相色谱法：氨基葡萄糖与盐酸羟胺的甲基咪唑溶液反应后，再加入乙酸酐进行乙酰化，产物以三氯甲烷提取，加入水反复水洗，弃去水层，有机层用无水硫酸钠脱水后，进样分析。色谱分析采用FID检测器和HP-5毛细管柱(30m×0.32mm×0.25μm)；进样口和检测器温度分别为250℃和300℃；以氮气为载气，流速1.2ml/min，分流比1:1：柱温：初始温度60℃，保持1min，以14℃/min的速度升温至260℃，保持5min；进样量：1μl。以甘露糖为内标，采用内标法定量。结果最佳衍生化条件为：氨基葡萄糖浓度为4.0mg·ml-1，加入100mg·ml-1盐酸羟胺溶液0.4ml，于80℃水浴中反应5min，乙酰化时间为10min。在上述条件下，氨基葡萄糖与内标甘露糖分离效果良好，线性范围为2.0～6.0mg·mL-1，四个样品的平均回收率分别为99.4％、99.7％、101.3％、101.1％。结论：该方法准确可靠，专属性好，可用于氨基葡萄糖及其制剂的质量控制。 以上三种氨基葡萄糖的含量测定方法均能有效控制药品的质量，其中紫外分光光度法简便快速，成本低廉，适合于基层推广用于检测高纯度杂质少的原料药和工业生产上用于计算氨基葡萄糖的产率，但对于复杂的样品易受干扰，结果偏差较大；气相色谱法因为前处理步骤复杂，精密度稍差，但其具有分析专一性好、灵敏度高的优点，对于复杂基质样品分析具有很好的效果，适合于制剂或生物样品中氨基葡萄糖的定量分析；而RP-HPLC衍生化法操作简单方便，同时具有较好的专属性，重复性和回收率也较好，对氨基葡萄糖原料药及制剂的精确定量分析均具有较好的效果。

目录

文摘

英文文摘

前言

第一部分美国药典中氨基葡萄糖含量测定方法正确性和可靠性的探讨

1仪器与材料

1.1仪器

1.2材料与试剂

2方法与结果

2.1溶液配制

2.2色谱条件与测定方法

2.3 SO42-峰与主峰的重叠的验证

2.4图中的主峰可能为Cl-的验证

3讨论

第二部分RP-HPLC衍生化法测定氨基葡萄糖原料及其制剂含量的研究

1仪器与材料

1.1仪器

1.2材料与试剂

2方法与结果

2.1溶液配制

2.2色谱条件的确定

2.3衍生化反应条件的选择

2.4方法学验证

2.5样品含量测定

3讨论

第三部分分光光度法测定氨基葡萄糖原料及其制剂含量的研究

1仪器与材料

1.1仪器

1.2材料与试剂

2方法与结果

2.1溶液配制

2.2试验步骤

2.3测定条件的选择

2.4专属性考察

2.5线性关系考察

2.6精密度试验

2.7回收率试验

2.8溶液稳定性

2.9样品含量测定

3讨论

第四部分衍生化气相色谱法测定氨基葡萄糖原料及其制剂含量的研究

1仪器与材料

1.1主要仪器

1.2材料与试剂

2方法与结果

2.1溶液配制

2.2色谱条件

2.3测定条件的选择

2.4方法学验证

2.5样品含量测定

3讨论

全文总结

参考文献

综述氨基葡萄糖的研究进展

在学期间发表的论文

致 谢