莳萝不同极性提取物抗炎抗氧化作用的研究

摘要

莳萝(AnethumgraveolensL.)又名洋茴香，是伞形科莳萝属中唯一的一种植物，莳萝是欧洲最常用的香料之一，也是我国常用的一种维药。本文以原产地荷兰的莳萝叶为原料，利用活性追踪法，对抗氧化和抗炎能力进行了分析，确定莳萝具有活性的提取物，并分析其抗氧化与抗炎作用之间的关系，为进一步分离活性物质提供理论基础。
　　采用DPPH法、总还原能力测定、ABTS法、FRAP法四种方法，以Vc作为阳性对照，测定并比较莳萝叶四种不同极性提取物:石油醚、乙酸乙酯、正丁醇、水的抗氧化能力，并讨论其与总酚和总黄酮含量之间的关系。结果表明莳萝四种提取物均有较好的抗氧化能力，且抗氧化能力与质量浓度呈良好的量效关系。其抗氧化能力依次为:乙酸乙酯提取物＞正丁醇提取物＞水提取物＞石油醚提取物。通过相关性分析发现，四种提取物的抗氧化能力均与总酚和总黄酮含量呈显著相关性，表明各组分中抗氧化物质主要是酚类和黄酮类物质。
　　以LPS诱导小鼠腹腔巨噬细胞（RAW264.7）建立炎症细胞模型，ELISA法测定一氧化氮(NO)、白介素-1β(IL-1β)、白介素-6（IL-6）、白介素-10(IL-10)的分泌量，RT-PCR法检测一氧化氮合成酶（iNOS）、IL-1β、IL-6、IL-10的mRNA表达量。以此为评价指标，分析石油醚、乙酸乙酯、正丁醇、水四种极性提取物的抗炎作用。结果显示石油醚提取物在50μg/mL时，可以显著下调NO、IL-1β、IL-6水平，并上调抗炎因子IL-10水平。乙酸乙酯、正丁醇、水极性提取物对此无显著性影响。确定极性最小的石油醚提取物具有较强的抗炎活性，为后期化学成分研究和抗炎机理研究奠定了基础。

目录

声明

摘要

1．前言

1．1 莳萝概述

1．1．1 莳萝的化学成分

1．1．2 莳萝生物活性

1．3 炎症与慢性疾病

1．3．1 脂多糖诱导的炎症

1．3．2 炎性因子

1．3．2 炎症与慢性疾病

1．4 天然抗炎药物

1．4．1 黄酮类化合物

1．4．2 萜烯类

1．4．3 皂苷类

1．4．4 多糖类

1．5 氧化应激与炎症

1．6 生物活性追踪法

1．7 本课题研究目的、意义及其内容

1．7．1 目的和意义

1．7．2 研究内容

2．材料与方法

2．1 材料

2．1．1 供试材料

2．1．2 主要试剂

2．1．3 实验仪器

2．1．4 主要试剂的配制

2．2 实验方法

2．2．1 莳萝活性成分的提取分离

2．2．2 莳萝不同极性提取物抗氧化能力测定

2．2．3 莳萝不同极性提取物的抗炎作用研究

2．2．4 莳萝不同极性提取物成分分析

3．结果与讨论

3．1 莳萝不同极性提取物抗氧化作用的研究

3．1．1 莳萝不同极性提取物清除DPPH自由基作用

3．1．2 莳萝不同极性提取物还原能力测定

3．1．3 FRAP法测定莳萝不同极性提取物抗氧化能力

3．1．4 莳萝不同极性提取物清除ABTS+·自由基能力

3．2 莳萝不同极性提取物抗炎作用的研究

3．2．1 脂多糖LPS刺激RAW264．7细胞药物浓度的选择

3．2．2 倒置显微镜和扫描电镜观察LPS刺激RAW264．7细胞前后形态变化

3．2．2 MTT法检测莳萝不同极性提取物对LPS诱导的RAW264．7细胞活性影响

3．2．3 硝酸还原酶法检测莳萝不同极性提取物对LPS诱导的RAW264．7细胞释放NO影响

3．2．4 莳萝不同极性提取物对LPS诱导的RAW264．7分泌IL-1p、IL-6和IL-10的影响

3．3 莳萝不同极性提取物对LPS诱导的RAW264．7中iNOS、IL-1β、IL-6和IL-10的mRNA表达的影响

3．3．1 RNA完整性检测结果

3．3．2 莳萝不同极性提取物对LPS诱导的RAW264．7中iNOS基因表达的影响

3．3．3 莳萝不同极性提取物对LPS诱导的RAW264．7中IL-1β基因表达的影响

3．3．4 莳萝不同极性提取物对LPS诱导的RAW264．7中IL-6基因表达的影响

3．3．4 莳萝不同极性提取物对LPS诱导的RAW264．7中IL-10基因表达的影响

3．4 莳萝不同极性提取物清除DPPH自由基和ABTS+·能力与总酚、总黄酮含量的相关性

4．结论

5．展望

参考文献

7．攻读硕士期间发表的论文

致谢