鸡生殖系干细胞培养与睾丸组织移植研究

摘要

鸡的生殖系干细胞包括原始生殖细胞(Primordial Germ Cells，PGCs)、性原细胞(Gonocyte Cells)和精原干细胞(Spermatogonial Stem Cells，SSCs)，它们都具有增殖和自我更新的能力，能在体外进行长期培养，是早期胚胎分化研究的体外模型。本研究分别以5.5日龄的鸡胚生殖嵴，18日龄鸡胚和出雏20-30日龄的公鸡睾丸为实验材料，对PGCs、性原细胞、SSCs进行长期培养，并采用PAS、AKP和免疫组化染色进行干细胞特征鉴定，在细胞形态、体外培养和生物学特征鉴定等方面比较PGCs、性原细胞和SSCs这三种干细胞的差异性。 实验研究结果如下： 1.在细胞形态上，PGCs个体要大于其它两种细胞，PGCs的细胞集落呈鸟巢状，细胞有伪足；性原细胞和SSCs细胞集落多呈葡萄串状，没有发现细胞伪足。 2.PGCs.性原细胞、SSCs原代培养24h后，PGCs的贴壁细胞数明显少于性原细胞和SSCs(P<0.01)，但是三种细胞的增殖率差异不显著(P>0.05)。 3.PGCs、性原细胞、SSCs传代培养过程中，在贴壁细胞数量和细胞增殖率两方面，都是PGCs最少，性原细胞其次，SSCs最多，三者之间差异极显著(P<0.01)。 4.经PAS染色法、AKP染色法和免疫化学染色鉴定，PGCs、性原细胞和SSCs均呈阳性，但是在AKP染色中，PGCs和性原细胞呈弱阳性，SSCs呈强阳性。 睾丸组织移植是将同种或者异种供体的睾丸从体内取出后切成组织块，异位移植到受体的皮下、腹腔等血管丰富的部位。本实验针对禽类的睾丸进行自体移植和异体移植的研究，对移植组织的生长发育状况作较为全面的检测，比较了不同移植部位、组织回收时间和供体种类对移植组织生长发育的影响。 实验研究结果如下： 1.禽类睾丸组织自体移植和异体移植都是可行的。 2.在移植部位上，腹腔和腹腔皮下移植组织生长发育情况差异不显著(P>0.05)，但是移植于腹腔皮下操作简单，而且受体鸡的感染情况较少，组织存活率要高。因而腹部皮下是睾丸组织移植较为理想的移植部位。 3.根据供受体和移植部位的不同，睾丸移植组织的回收时间也有一定的差异。自体移植中，腹腔中的移植组织的理想回收时间为移植后3周，腹部皮下的移植组织理想回收时间为移植后1个月。异体移植的理想回收时间应为移植后120天。 4.在供体选择上，40日龄的广西土鸡自体移植1个月后生长发育状况良好，并且有高度活率的精子产生，因而适合作为睾丸组织自体移植的材料。异体移植中组织发育较为缓慢，可选择免疫原性较低的新生雏鸡作为供体。 5.同种异体移植(广西土鸡—广西土鸡)的组织在移植120天后可从组织内获得有活力的精子，生长发育情况优于异种异体移植，但是异种异体移植(竹丝鸡—广西土鸡)可以随时观察组织生长情况，大大简化了对组织移植生长发育的观测。

目录

文摘

英文文摘

声明

文献综述

1鸡生殖系干细胞的研究概况

1.1鸡生殖系干细胞的来源和概念

1.2鸡生殖系干细胞的生物学特性与鉴定

1.3鸡生殖系干细胞的分离纯化

1.4鸡生殖系干细胞的体外培养

1.5鸡生殖系干细胞的应用

2鸡睾丸组织移植研究

2.1研究概况

2.2供体的选择

2.3受体的准备

2.4睾丸移植的部位

2.5移植物的处理

2.6移植物的检测

2.7睾丸组织移植的应用

3本研究的目的和意义

实验部分

实验一鸡生殖系干细胞培养

1材料与方法

2结果与分析

3讨论

实验二鸡睾丸组织移植研究

1材料与方法

2结果与分析

3讨论

结论

参考文献

致谢

攻读学位期间发表的学术论文