杨梅疏果核仁中苦杏仁苷的提取纯化及其功能活性评价

摘要

杨梅疏果（Thinned bayberry）是由于杨梅果树坐果率过高而采取的丰产措施，疏下来的果实通常被丢弃。杨梅疏果中的化学成分种类与成熟果实相当，其果核中同时含有苦杏仁苷（Amygdalin）成分。目前对杨梅疏果核仁(Thinnedbayberry kernel，TBK)中苦杏仁苷的研究较少。本研究通过超声波辅助提取法提取TBK中的苦杏仁苷，并对其体外抗氧化活性和止咳祛痰功能进行了初步评价。研究结果如下:
　　(1)选取东魁、荸荠、丁岙和晚稻四个不同品种杨梅的不同阶段疏果的核仁为原料，测定TBK的物理化学性质。结果显示，随着杨梅果实的成熟，核仁趋于饱满，核仁占果核的比例不断增加，最高达到8.76％。四个品种的TBK水分含量显著下降(P＜0.05);粗脂肪和粗蛋白含量显著增加(P＜0.05），总糖含量未呈现出规律性变化。这些TBK中水分、灰分、脂肪、蛋白质和总糖的含量（以鲜重计）分别为30.16％-92.87％，0.53％-3.23％，0.54％-41.67％，1.12％-20.67％和0.65％-3.38％。采用高效液相色谱法对各品种各阶段TBK中的苦杏仁苷进行含量分析，发现TBK中苦杏仁苷的含量随着果实的成熟均显著增加(P＜0.05)，其中以丁岙种第三阶段疏果的苦杏仁苷含量最高，达到28.25mg/g（以鲜重计）。
　　(2)采用超声波辅助溶剂提取法，对丁岙种杨梅第三阶段疏果核仁中的苦杏仁苷进行提取研究。在单因素和二水平试验的基础上，以苦杏仁苷的提取率作为响应值，响应面优化后的提取参数为:乙醇浓度27％(V/V)，料液比为1∶45(W/V)，提取时间为20min，超声温度为44℃，超声功率为250W，此时TBK苦杏仁苷的实际提取率为93.80％，得率为4.60％。
　　(3)本研究建立了TBK粗提液中苦杏仁苷的分离纯化方法，得到最佳纯化工艺为:以D101型大孔树脂为吸附介质;上样液中苦杏仁苷初始浓度为129-358mg/L，上样流速2BV/h;洗脱液为3 BV的纯水以及随后的11BV的乙醇-水溶液(40∶60，v/v)，洗脱流速2BV/h。经过一次D101型大孔吸附树脂处理，产物的纯度为82.00％±1.71，纯度约增加了17倍，其平均回收率为77.94％±4.39。
　　(4)采用DPPH和ABTS抗氧化体系，考察TBK粗提物和精提物的抗氧化活性。发现TBK提取物对DPPH自由基和ABTS自由基具有良好的清除效果，且提取物浓度与清除率表现出较好的相关性。经分析计算得到粗提物与精提物清除DPPH自由基的IC50值分别为1335mg/L和261mg/L，清除ABTS自由基的IC50值分别为1447mg/L和281mg/L。TBK精提物较粗提物表现出了更好的体外抗氧化活性。
　　(5)通过小鼠止咳祛痰功能试验，得到TBK粗提物45、90、180mg/kg各剂量能够不同程度地延长氨水引咳小鼠的咳嗽潜伏期，减少2min内的咳嗽次数，其中90mg/kg剂量组咳嗽潜伏期较对照组明显延长(P＜0.05）。TBK粗提物各剂量组以及苦杏仁苷标准品对小鼠气管酚红排泌量影响不显著，提示无明显祛痰作用。

目录

摘要

1 绪论

1．1 杨梅果实概述

1．2 苦杏仁苷概述

1．2．1 苦杏仁苷的基本性质

1．2．2 苦杏仁苷的测定方法

1．2．3 苦杏仁苷的提取与纯化方法

1．2．4 苦杏仁苷的生物学功能

1．3 止咳功能研究方法

1．3．1 细胞实验方法

1．3．2 动物实验方法

1．4 论文研究的目的和主要内容

1．4．1 本研究的目的和意义

1．4．2 本论文的主要研究内容

2 杨梅疏果核仁主要物理性质和化学成分研究

2．1 引言

2．2 材料与方法

2．2．1 试验材料

2．2．2 主要试剂

2．2．3 主要仪器设备

2．2．4 试验方法

2．3 结果与分析

2．3．1 各品种各阶段TBK的理化性质比较

2．3．2 杨梅核仁中苦杏仁苷含量的比较

2．4 小结

3 杨梅疏果核仁中苦杏仁苷的提取工艺研究

3．1 引言

3．2 材料与方法

3．2．1 试验材料

3．2．2 主要试剂

3．2．3 主要仪器

3．2．4 试验方法

3．3 结果与分析

3．3．1 单因素试验结果

3．3．2 二水平试验结果

3．3．3 Box-Behnken响应面优化试验

3．4 小结

4 杨梅疏果核仁中苦杏仁苷的分离纯化

4．1 引言

4．2 材料与方法

4．2．1 试验材料

4．2．2 主要试剂

4．2．3 主要仪器

4．2．4 试验方法

4．3 结果与分析

4．3．1 大孔树脂含水量的测定

4．3．2 大孔树脂吸附量、吸附率和解吸率的测定

4．3．3 D101型大孔树脂的静态吸附动力学曲线

4．3．4 D101型大孔树脂对苦杏仁苷的吸附等温线

4．3．5 洗脱液浓度的优化

4．3．6 动态吸附解吸试验

4．4 小结

5 杨梅疏果核仁提取物的抗氧化活性及止咳祛痰功能研究

5．1 引言

5．2 材料与方法

5．2．1 试验材料

5．2．2 主要试剂

5．2．3 主要仪器

5．2．4 试验方法

5．3 结果与分析

5．3．1 DPPH自由基清除率

5．3．2 ABTS自由基清除率

5．3．3 对氨水引咳小鼠咳嗽的影响

5．3．4 对小鼠气管酚红排泌量的影响

5．4 小结

6 结论与展望

6．1 结论

6．2 展望

附录 论文使用的缩写说明

参考文献

致谢

攻读学位期间取得的研究成果

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