三叶青提取物体内抗肿瘤的研究

摘要

癌症严重威胁人类的生命。据世界卫生组织统计，全世界每年死于癌症的病人大约500多万，癌症治疗和预防的任务十分艰巨。药物治疗是癌症治疗的三大疗法之一。多年来人类一直在不断地进行抗肿瘤药物的研究，抗肿瘤药物的筛选是整个研究过程中很重要的一个环节，而进行药物的筛选首先离不开合理的筛选方法和系统。世界各国对抗肿瘤药物的筛选都非常重视，投入了大量的人力、物力和财力，每年都有大量的化合物待筛(合成物、天然产物和微生物发酵产物)。找到有效、安全、副作用小的抗肿瘤药物一直是肿瘤药物研究者的追求目标。近年来，随着生命科学技术的进步发展，新的抗肿瘤药物不断涌现，尤其是药用植物中的抗肿瘤成分研究得到高度重视。 三叶青是一种重要抗肿瘤药用植物，在我国已有多年的使用历史，药理实验表明三叶青提取物有抗病毒作用和消炎镇痛及保肝作用，在民间三叶青用于抗肿瘤的治疗具有明显效果。本研采用石油醚、乙酸乙酯、正丁醇、水四种物质萃取三叶青各个不同溶解极性成分，采用水层提取物为研究对象，旨对不同提取物对肿瘤的抗性作用进行深入的研究，其主要研究内容和取得的结果如下： 1、按S180移植瘤的方法，建立S180小鼠实体瘤模型，设置两个三叶青剂量组(每天灌胃给予相当生药量5g/kgB.W、15g/kgB.W，按人服药量的10、30倍计算)、肿瘤对照组(灌胃给予蒸馏水)、阳性对照组(腹腔注射环磷酰胺20mg/kgB.W，隔天注射)和正常对照组(灌胃给予蒸馏水)。 采用给药10天于次日处死小鼠并剥离完整肿瘤组织的方法计算抑瘤率，结果显示三叶青高剂量组、阳性对照组抑瘤率达到36.06％、77.37％，具有明显的抑瘤的作用，而三叶青低剂量组抑瘤率只有6.64％，抑瘤作用不明显。 采用给药10天后于次日内眦静脉采血方法测定血液中SOD活力、CAT及MDA含量。结果表明，三叶青水层提取物高剂量组能显著提高荷瘤小鼠溶血液中CAT的活性、降低MDA的含量，但对SOD活性无明显作用。 通过给药10天后于次日内眦静脉采血，用流式细胞仪检测CD3、CD4、CD8的含量，肿瘤对照组与正常对照组相比，结果表明：CD3、CD8分别升高了59.4％、58.7％，CD4降低了27.9％，CD4/CD8比值降低了45.5％。经三叶青提取物干预后，低剂量组各指标均无显著性改善，但高剂量组中，CD3、CD8明显降低，CD4明显升高，CD4/CD8比值升高，其中CD3、CD4、CD8已经接近正常组值。环磷酰胺阳性对照组与肿瘤对照组相比，CD3含量并未降低反而升高了58.5％，CD4明显升高，CD8有所降低，CD4/CD8比值升高且接近正常组的值。 2、按S180腹水瘤的方法，建立S180小鼠腹水瘤模型，设置两个三叶青剂量组(每天腹腔注射相当生药量5g/kgB.W、15g/kgB.W，按人服药量的10、30倍计算)、肿瘤对照组(腹腔注射蒸馏水)、阳性对照组(腹腔注射环磷酰胺20mg/kgB.W，隔天注射)和正常对照组(腹腔注射蒸馏水)。 采用给药10天后于次日抽取腹水的方法，通过流式细胞仪检测腹水细胞的凋亡情况，结果显示：三叶青提取物高剂量的腹水瘤细胞凋亡率达39.69％，其作用远高于对照组0.86％的细胞凋亡率。 综上结果，表明中药三叶青水层提取物具有明显的抗肿瘤作用，其作用机理与调节体内抗氧化酶活性、通过改善机体的T淋巴细胞亚群的功能恢复机体免疫功能及诱导细胞凋亡有关，可进一步展开深入研究。

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论文说明：图表目录

声明

第一部分文献综述

第一章 中医药抗肿瘤作用的研究进展

1.1概述

1.2中医药抗肿瘤的主要作用

1.3抗肿瘤药物的筛选方法

1.4近十年抗肿瘤中草药的研究进展

第二章中药三叶青的研究进展

2.1中药三叶青的研究

2.2课题的提出及目的意义

第二部分实验研究部分

第三章中药三叶青有效成分的提取分离

3.1试验材料

3.2试验方法

第四章三叶青提取物对S180荷瘤小鼠抑瘤率的研究

4.1材料与方法

4.2结果

4.3结论

第五章三叶青提取物对S180荷瘤小鼠体内氧化酶含量的影响

5.1材料与方法

5.2 结果

5.3 结论

第六章三叶青提取物对S180荷瘤小鼠细胞免疫功能的影响

6.1材料与方法

6.2结果

6.3 结论

第七章三叶青提取物对S180荷瘤小鼠腹水瘤细胞凋亡的影响

7.1材料与方法

7.2结果

7.3 结论

总 结

附件1：重要溶液的配制

参考文献

致谢