肝癌细胞系PLC/PRF/5中CD133细胞的生物学性质

摘要

背景肿瘤复发现象在癌症患者中极为常见，此现象被认为是逃避了化疗、放射治疗以及手术切除的肿瘤干细胞引起的。研究发现，肿瘤干细胞的增殖能力较非干细胞的肿瘤细胞强，并推测肿瘤干细胞的抗药能力也比其它肿瘤细胞强，所以肿瘤干细胞被认为是肿瘤发生的细胞起源，以及肿瘤复发的源泉。基于肿瘤干细胞与正常干细胞之间的相似性质，科学家建立了一系列从肿瘤组织或肿瘤细胞系分离和鉴定肿瘤干细胞的实验方法，其中较为常用的是用流式细胞仪分选CD133+细胞的方法。CD133+细胞在很多正常组织中充当干细胞功能，多项研究证实CD133+肿瘤细胞比CD133ˉ肿瘤细胞具有更接近干细胞的性质，比如在体外培养，CD133+细胞更容易形成克隆，增殖更快；注射到实验动物体内，CD133+细胞更易于形成肿瘤。另一种重要的分选肿瘤干细胞的方法是SP细胞分选法，多种肿瘤组织和肿瘤细胞系的干细胞都被证实富集在SP细胞群中。但是CD133+细胞和SP表型的关系尚不明了。另外，已有研究表明SP细胞比非SP细胞抗药能力强，但CD133+细胞的抗药能力还未确认。因此本课题以肝癌细胞系PLC/PRF/5为标本，主要通过体外增殖实验来研究CD133+细胞的增殖能力，利用Cisplatin处理细胞来验证CD133+细胞的抗药能力，以及利用SP检测来探讨CD133+细胞和SP表型的关系。目的1、建立成熟的流式细胞仪技术平台，检测肝癌细胞系PLC/PRF/5中CD133表达情况。 2、研究肝癌细胞系PLC/PRF/5中CD133+细胞的体外增殖能力。 3、研究肝癌细胞系PLC/PRF/5中CD133+细胞抗药的能力。 4、研究肝癌细胞系PLC/PRF/5中CD133+细胞与SP表型的关系。方法利用流式细胞仪分选出CD133+细胞与CD133ˉ细胞，进行克隆形成实验和MTT法检测细胞活性实验，来比较CD133+细胞与CD133ˉ细胞的体外增殖能力。利用化疗药物Cisplatin处理分选出来的细胞，通过细胞计数和MTT实验比较CD133+细胞与CD133ˉ细胞的抗药能力。最后，利用流式细胞仪检测和比较CD133+细胞与CD133ˉ细胞中SP细胞所占的比例。结果1、肝癌细胞系PLC/PRF/5中有较高的CD133+细胞比例。 2、CD133+细胞的体外增殖能力显著比CD133+细胞强。 3、CD133+细胞的体外抗Cisplatin能力并不优于CD133ˉ细胞。 4、CD133+细胞中SP细胞比例极显著比CD133ˉ细胞中的低。

目录

文摘

英文文摘

论文说明：缩略语表

声明

引 言

一肿瘤干细胞假设及肿瘤干细胞基本生物学特性

二CD133——肿瘤干细胞的表型标记

三SP表型——多种肿瘤干细胞的特征和细胞抗药能力的指标

四CD133+细胞与SP表型的关系的研究

五选题意义

研究目的

课题来源

研究内容

一实验材料

1.主要试剂

2. 主要溶液的制备

3. 主要仪器

4. 实验耗材

5. 细胞系来源及培养条件

二实验方法

1. 流式细胞仪检测和分选CD133+细胞

2. 流式细胞仪检测和分选SP细胞

3. 细胞增殖实验

4. CD133+、CD133-和未分选细胞中CD133+细胞含量的变化

5. 细胞体外抗药性检测

三.实验结果

1. 肝癌细胞系PLC/PRF/5表达CDl33的情况

2. 肝癌细胞系PLC/PRF/5中SP细胞的比例

3. 细胞增殖的情况

4. 细胞抗药实验

5. CD133+细胞和CD133-细胞体外培养过程中CD133+细胞比例的变化

四讨论

结 论

展 望

参考文献

致谢

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