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论文说明：缩略语
声明
第一章 文献综述
引言
1 CMC类家族蛋白的发现
2 CMC类家族蛋白的同源分析
3 CMC类家族蛋白的进化分析
4 CMC类超家族蛋白的结构与功能
4.1 酵母体内参与铜运输的伴侣分子
4.2 酵母线粒体内铜的运输
5 CMC类超家族蛋白的研究现状
6 CMC类超家族蛋白研究前景
第二章 实验方案设计
1 实验目的和意义
2 研究内容
3 实验流程图
第三章 生物信息学分析
1 材料与工具
1.1 材料
1.2 生物信息学工具
2 方法
3 结果
3.1 BmCMC基因的序列
3.2 BmCMC基因结构分析
3.3 BmCMC蛋白二级结构的预测
3.4 BmCMC蛋白的三级结构预测
3.5 BmCMC蛋白的疏水性分析
3.6 BmCMC蛋白的跨膜区预测分析
3.7 BmCMC蛋白的信号肽分析
3.8 BmCMC蛋白的功能位点预测分析
3.9 BmCMC蛋白在细胞中定位的分析
3.10 BmCMC氨基酸序列的同源性分析
4 讨论
第四章 BmCMC的克隆与原核表达
1 材料与试剂
1.1 材料
1.2 试剂
1.3 主要试剂的配制
2 方法
2.1 BmCMC基因的克隆
2.2 BmCMC基因的表达
3 结果
3.1 PCR扩增目的片段
3.2 重组质粒的PCR扩增和双酶切鉴定
3.3 序列测定
3.4 重组蛋白的诱导表达
4 讨论
第五章 重组蛋白的纯化与多克隆抗体的制备
1 材料与试剂
1.1 材料
1.2 试剂
1.3 试剂的配制
2 方法
2.1 包涵体的溶解与复性
2.2 镍柱亲和层析
2.3 Bradford检测蛋白浓度
2.4 融合蛋白的FPLC纯化
2.5 融合蛋白分子量的质谱鉴定
2.6 抗体制备
2.7 Western blotting检测抗体特异性
3 结果
3.1 重组蛋白的纯化结果
3.2 FPLC分离纯化
3.3 融合蛋白分子量的质谱鉴定
3.4 抗体的纯化
3.5 抗体的效价测定
3.6 Western blotting检测抗体特异性
4 讨论
第六章 亚细胞定位
1 材料与试剂
1.1 材料
1.2 试剂
1.3 主要试剂的配制
2 免疫荧光法亚细胞定位的方法
3 免疫荧光法亚细胞定位结果
4 讨论
第七章 BmCMC蛋白的表达分析
1 材料与试剂
1.1 材料
1.2 试剂
1.3 主要试剂的配制
2 方法
2.1 提取总RNA
2.2 荧光定量PCR引物的设计
2.3 合成cDNA第一链
2.4 总蛋白的提取
2.5 荧光定量PCR
2.6 荧光定量PCR数据分析
2.7 总蛋白质的提取及定量
2.8 Western blotting检测BmCMC蛋白的分布
3 结果
3.1 家蚕发育过程中BmCMC mRNA表达量的变化
3.2 家蚕五龄幼虫各组织中BmCMC mRNA表达量分析
3.3 家蚕各时期BmCMC蛋白表达量分析
3.4 五龄幼虫各组织中BmCMC蛋白表达量分析
4 讨论
结论与创新点
参考文献
致谢
