免疫抑制剂Fk506对乳腺肿瘤细胞株的体外作用研究

摘要

本实验利用FK506(Tacrolimus),对乳腺肿瘤细胞系MCF-7进行体外作用研究,发现FK506可以抑制乳腺肿瘤细胞增殖;MTT结果显示,24 h与48 h的半抑制浓度基本一致,说明其在较短时间内即可发挥有效作用。细胞形态学观察以及细胞染色表明,FK506没有诱导细胞凋亡,而很可能是抑制了细胞的分裂。
　　 由于FK506的结合底物FKBP4(FK506 binding protein4)是免疫亲和蛋白家族中的一员,主要作用是作为辅分子伴侣,与固醇类受体形成复合体,帮助其折叠,稳定以及转运;同时,它在细胞骨架的装配以及细胞分裂器定位调节中也发挥了重要作用,因此,FK506抑制乳腺肿瘤细胞增殖有可能与FKBP4的功能有关。此外,脚手架蛋白GIPC1(GIPC PDZdomain containing family,member1),作为乳腺肿瘤细胞的重要分子标记之一,是FKBP4一个潜在的相互作用蛋白。本实验室在先前的研究中发现,在乳腺肿瘤干细胞中,存在FKBP4与GIPC1共低表达现象,说明二者有可能存在功能相关性。还有实验表明,GIPC1与IGF1R结合,可以使之稳定,进而促进细胞增殖,抑制凋亡。因此,推测FK506是通过影响FKBP4与GIPC1相互作用,进而破坏IGF1R的稳定性而导致细胞增殖的抑制。然而免疫共沉淀实验未发现两者之间存在相互作用,蛋白印迹也未检测到IGF1R的含量与磷酸化状态在药物处理前后有明显变化。这虽未揭示FK506的作用机制,但也暗示,虽然在固醇类受体介导的信号转导中,需要FKBP4的积极参与,但在作为膜受体代表的IGF1R信号通路里,FKBP4却未呈现出相应的作用。这从另一方面说明,FKBP4作为辅分子伴侣对其底物选择具有一定的专一性,作用对象可能主要是位于核内的固醇类受体,而非膜受体。
　　 经双向电泳(2-DE)蛋白质表达图谱和MALDI-TOF-TOF质谱分析,发现有17个蛋白在FK506处理细胞前后表达量发生明显差异,并进一步从中鉴定出12个蛋白。根据功能将这些蛋白分为两大类:一类调节细胞骨架的装配与运输,从而影响神经发育与细胞分裂;另～类与基因存在密切的相互作用,参与了其复制,修复,转录调节以及翻译后蛋白的折叠,从而影响细胞分裂周期与凋亡。这些蛋白为我们明确FK506抑制细胞增殖的作用机制提供了基础。同时,FKS06可以抑制乳腺肿瘤细胞增殖这一功能,也为其成为临床治癌药物提供了可能性。