慢性应激对大鼠海马胶质细胞的不对称性影响

摘要

目的：通过建立慢性不可预见温和应激大鼠模型，考察①慢性应激所致大鼠学习记忆行为损伤是否在移除应激源之后得到自然恢复；②慢性应激下海马胶质细胞中的GFAP和EAAT2蛋白表达是否会发生改变；③研究慢性应激条件下，胶质细胞中的GFAP和EAAT2蛋白在大鼠海马三个亚区的表达情况，确定慢性应激对海马的损伤是否存在靶点。④研究慢性应激对胶质细胞中的GFAP和EAAT2蛋白表达在大鼠海马是否存在不对称性影响，并证明以往我们在研究中所发现的，慢性应激对海马的损伤具有右侧偏侧化的特点。⑤研究大鼠海马中胶质细胞中的GFAP和EAAT2蛋白表达是否会随着应激源的去除而得到恢复，进一步探讨慢性应激造成的海马损伤的修复机制问题。
　　方法：将雄性Sprague-Dawley大鼠随机分配到对照组、应激组和恢复组，建立慢性不可预见性应激模型，恢复组大鼠移除应激源后给予5周的自然恢复时间。应激模型和恢复模型结束后进行行为测试，考察大鼠海马空间学习和记忆功能的变化，行为实验包括旷场实验、水迷宫实验和Y迷宫实验三部分。行为实验结束后对慢性应激组和对照组大鼠进行蛋白免疫印迹实验，检测慢性应激后大鼠海马星形胶质细胞结构和功能相关蛋白（GFAP和EAAT2）的表达水平是否发生变化。随后对三组大鼠海马组织进行免疫组化实验，分别考察在海马三个亚区中慢性应激是否对星形胶质细胞具有不对称性作用，并进一步检测移除应激35天后这种改变是否得到逆转。
　　结果：①慢性应激导致海马空间记忆和行为功能受损，并在应激移除后得到一定程度的自然恢复，表现为水迷宫实验中恢复组大鼠在学习阶段逃离潜伏期显著地低于应激组和对照组(P<0.01)，Y迷宫实验中应激组大鼠并未表现出对新异臂的偏好，恢复组与对照组均表现出新异臂穿梭次数百分比显著高于其他两臂（P<0.05）；②大鼠海马星形胶质细胞中的GFAP和EAAT2两种蛋白在慢性应激中的表达发生改变，GFAP表达显著上调（P<0.05），EAAT2表达出现下降（P<0.05）；③在慢性应激后，海马不同亚区星形胶质细胞中GFAP和EAAT2两种蛋白表达水平在DG区变化不明显，在CA1和CA3区有明显改变，其中CA3区最为显著；④慢性应激过程中，大鼠海马星形胶质细胞中GFAP和EAAT2两种蛋白表达在CA1和CA3区存在不对称性，尤其以右侧改变明显；⑤移除应激源后自然恢复35天后，慢性应激导致的星形胶质细胞结构和功能的变化出现部分的恢复，但是并未完全达到正常水平。
　　结论：①大鼠对慢性应激导致海马空间记忆和行为受损具有一定的自我恢复能力。②星形胶质细胞中GFAP和EAAT2两种蛋白的改变是慢性应激导致记忆、行为损伤的重要作用机制之一。③大鼠海马的CA1和CA3区，尤其是CA3区，可能是慢性应激损伤的重要靶点。④慢性应激对海马星形胶质细胞的损伤存在右侧偏侧化的特点。⑤慢性应激一旦造成海马结构损伤，其修复速度比学习记忆行为等功能的恢复要慢，具体机制则需要进一步探讨。

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缩略语

引言

1文献综述

1.1慢性应激

1.2脑不对称性

1.3海马

1.4星形胶质细胞

1.5 慢性应激的恢复

2 研究设计

2.1 研究目的

2.2研究意义

2.3 研究内容

2.4 研究假设

2.5 研究创新

2.6 研究方法

3 研究一：慢性应激对大鼠海马功能的影响

3.1 材料和方法

3.2 动物行为实验

3.3 统计方法

3.4 结果

3.5 讨论

3.6 小结

4 研究二：慢性应激导致大鼠海马不同亚区中星形胶质细胞中GFAP和EAAT2蛋白表达水平的不对称性改变

4.1 材料和方法

4.2 结果

4.3 讨论

5总讨论

6 结论与展望

6.1 研究结论

6.2 展望与不足

参考文献

附录一 Western blot

附录二组织处理

附录三 免疫组化 EnVision二步法

致谢