低浓度毒死蜱暴露对小鼠胚胎侧脑室组织形态结构发育的影响

摘要

有机磷农药毒死蜱（Chlorpyrifos，CPF）能够引起神经发育毒性，体外实验表明，CPF直接影响PC12细胞由增殖转向分化过程的发育命运[1]。体内实验发现，胚胎期与新生期的CPF暴露导致持久的脑神经递质机能紊乱、认知异常以及脑结构损伤。但胚胎期CPF如何导致脑结构机能发育异常的作用机制目前并不清楚。本文从胚胎侧脑室顶底极性的角度，研究CPF对新皮层增殖池/分化池的不同影响，并探讨了胚胎期CPF暴露后前额叶皮层中部ACd区域的远期影响。
　　我们首先在E7.5-11.5对母鼠皮下注射5mg/kg/d的CPF，分别在E12、E14、E16三个不同阶段，处死母鼠取得胚胎，制备胚胎脑定位切片并进行HE染色。测量侧脑室壁不同分层的厚度，评估CPF暴露对不同神经发育期增殖分化池的影响;其次，对E14脑切片进行神经祖细胞标记物pax6和神经元标记物TUJ1的免疫组化染色，评估CPF暴露对神经祖细胞以及神经元的不同影响;我们还研究了E13-17对母鼠皮下注射5mg/kg/d的CPF暴露后，子代鼠PND60时大脑前额叶皮层中部ACd区域的细胞形态、数目的改变。
　　研究结果表明，随着神经发育的进程，CPF的暴露使胚胎脑呈现出增殖层厚度降低，分化层厚度增加的趋势，在E16呈现明显变化。在E14，免疫组化染色结果发现CPF暴露使神经祖细胞数目下降，但对神经元数目的影响不大。对胚胎期暴露CPF后成年期脑ACd区域的组织结构分析结果发现，区域内细胞总数减少，神经元和胶质细胞也分别减少，但是细胞形态无明显病理性改变。上述结果从在体胚胎脑结构角度，进一步证实CPF胚胎期暴露改变了胚胎神经发育中神经祖细胞的增殖与分化平衡，并证实CPF的胚胎期暴露，能损伤成年期ACd区域的脑组织结构。

目录

声明

摘要

主要缩略词一览表

第一章 综述

1．1 引言

1．2 毒死蜱的神经发育毒性

1．2．1 体外细胞毒性

1．2．2 在体的神经发育毒性

1．3 侧脑室壁的发育过程

1．3．1 胚胎期侧脑室壁的分层结构

1．3．2 侧脑室壁的神经祖细胞与神经元

1．3．3 Aps与BPs

1．4 前额叶皮层的发育

1．5 研究背景和意义

1．6 研究内容以及创新

第二章 低浓度毒死蜱暴露对不同胚胎发育阶段侧脑室壁组织分层的影响

前言

2．1 实验材料

2．1．1 实验动物

2．1．2 实验药品

2．1．3 实验仪器

2．1．4 实验主要试剂

2．2 实验方法

2．2．1 建立孕鼠模型

2．2．2 分组处理

2．2．3 定时胚胎制备与固定

2．2．4 石蜡切片制作步骤

2．2．5 HE染色实验步骤

2．2．6 侧脑室壁不同层厚度测量

2．2．7 统计分析

2．3 实验结果与讨论

2．3．1 CPF暴露对E12侧脑室的影响

2．3．2 CPF暴露对E14侧脑室的影响

2．3．3 CPF暴露对E16侧脑室的影响

2．3．4 结果分析与讨论

第三章 低浓度毒死蜱暴露对E14侧脑室神经前体细胞与神经元数量的影响

前言

3．1 实验材料

3．1．1 实验动物

3．1．2 实验药品

3．1．3 实验仪器

3．1．4 实验主要试剂

3．2 实验方法

3．2．1 孕鼠模型建立

3．2．2 分组处理

3．2．3 定时胚胎制备与固定

3．2．4 石蜡切片制作步骤

3．2．5 免疫组化染色步骤

3．2．6 侧脑室定位、形态观察以及计数

3．2．7 统计分析

3．3 实验结果

3．3．1 CPF暴露对TUJ1表达的影响

3．3．2 CPF暴露对侧脑室Pax6表达的影响

3．4 讨论

第四章 胚胎期暴露低浓度毒死蜱对成年期ACd区域组织结构的影响

前言

4．1 实验材料

4．1．1 实验动物

4．1．2 实验试剂

4．1．3 实验仪器

4．1．4 实验主要溶液

4．2 实验方法

4．2．1 实验动物处理

4．2．2 脑室灌流

4．2．3 石蜡切片制作

4．2．4 1％甲苯胺蓝染色

4．2．5 内侧前额叶形态学观察以及计数

4．2．6 数据统计分析

4．3 结果

4．3．1 CPF对ACd总细胞数的影响

4．3．3 CPF对ACd神经元的影响

4．3．4 CPF对ACd神经胶质细胞的影响

4．4 讨论

第五章 实验总结与展望

参考文献

致谢

攻读学位期间主要的研究成果