高分子量透明质酸治疗LPS诱导的急性肺损伤的活性研究及初步机制探索

摘要

目的:急性肺损伤是临床上的危重症，目前无特效药。透明质酸(HA)是内源性物质，可保湿、抗肿瘤、免疫调节等。但其对于急性肺损伤的作用研究较少。研究HA对急性肺损伤是否具有治疗作用以及相关机制具有重要意义。
　　方法:(1)细胞实验:用不同浓度LPS（1，10，50，100μg/mL）刺激A549细胞不同时间点后(3，6，12，24h)，分别通过qPCR和ELISA法检测炎症因子IL-6，IL-8，TNF-α，IL-1β的mRNA和蛋白表达量，探索LPS最佳作用浓度和作用时间，建立急性肺损伤模型;用0.3，0.5，0.7，1mg/mL的特定高分子量的HA治疗LPS诱导的急性肺损伤，qPCR和ELISA法分别检测IL-6，IL-8，TNF-α，IL-1β的rmRNA和蛋白表达量，探索HA治疗的量效关系。(2)动物实验:SD大鼠随机分为对照组、LPS(5mg/kg)组、LPS+HA（3.5mg/mL）组，右肺固定后做石蜡切片，HE染色后病理学观察，确认建立急性肺损伤模型及初步探索HA治疗效果;SD大鼠随机分为对照组、LPS组、LPS+HA(1mg/mL)、LPS+HA(2mg/mL)、LPS+HA(3.5mg/mL)组，左肺收集支气管肺泡灌洗液，离心后沉淀物用于中性粒细胞和单核细胞计数;统计存活率，探索HA对LPS诱导的急性肺损伤大鼠死亡率的影响。(3)从分子水平初步探究HA对LPS诱导的急性肺损伤的干预机制，RT-PCR,qPCR检测TLR4mRNA表达变化，Western Blot检测胞浆蛋白IκB-α变化，NF-κB p65蛋白胞浆和胞核转移变化。
　　结果:(1)1μβ/mL的LPS诱导A549细胞急性肺损伤模型成功建立;qPCR和ELISA检测结果显示，HA治疗急性肺损伤效果在0.3～0.7mg/mL有效浓度范围内随着浓度升高而愈加显著。(2)与LPS诱导的急性肺损伤模型组相比，HA治疗组大鼠肺组织结构清晰完整，炎性细胞中性粒细胞、单核细胞浸润减少，数量下降，且呈现HA剂量依赖性，说明HA治疗减轻了LPS诱导产生的炎症;HA治疗组大鼠死亡率降低，且呈现出HA剂量依赖性。(3)RT-PCR和qPCR结果显示HA治疗后抑制TLR4mRNA表达，Western Blot结果显示HA治疗后促进IκB-α蛋白表达，抑制NF-κB p65蛋白由胞浆向胞核转移。
　　结论:体内外实验结果表明特定高分子量透明质酸对LPS诱导的急性肺损伤具有治疗效果且呈现浓度依赖性，其通过NF-κB信号通路干预LPS诱导的A549炎症反应。

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致谢

摘要

缩略词简表

1．1 急性肺损伤简介

1．2 急性肺损伤发病机制

1．3 急性肺损伤药物治疗

1．4 透明质酸与急性肺损伤

1．5 研究内容及意义

第二章 高分子量透明质酸治疗LPS诱导的急性肺损伤的活性研究

2．1 体外细胞实验

2．1．1 急性肺损伤模型的建立

2．1．2 HA对LPS诱导的A549细胞急性肺损伤模型的治疗作用

2．2 体内实验

2．2．1 急性肺损伤模型建立及HA治疗效果初步探索

2．2．2 HA治疗量效关系探索

第三章 高分子量透明质酸治疗LPS诱导的A549细胞急性肺损伤的初步机制探索

3．1 材料

3．2 方法

3．3 结果

3．4 讨论

总结与展望

参考文献

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