姜黄素及其类似物在Caco-2细胞模型中的吸收转运研究

摘要

姜黄素(Cur)是一种天然的强抗氧化剂，对肿瘤、炎症、老年痴呆症等各种恶性疾病具有预防治疗作用。但由于姜黄素极差的稳定性和水难溶性降低了其在体内的生物利用度，严重限制了其在临床的应用。CB和FE是课题组合成的两个新型姜黄素类似物，较姜黄素具有更好的抗氧化和抗肿瘤功效，而且生物稳定性更佳。
　　目的:利用Caco-2细胞考察Cur、CB和FE的细胞摄取情况，并利用体外Caco-2细胞单层模型研究Cur、CB和FE的肠道转运过程及转运机制。
　　方法:首先考察了Cur、CB和FE在Caco-2细胞中的摄取情况。之后建立Caco-2细胞单层模型并对其完整性及紧密性进行评价，用评价合格的模型对Cur、CB和FE进行模拟肠道转运研究，用HPLC法测定药物的转运量并计算Papp值，推测药物的转运机制。
　　结果:①细胞摄取的实验结果表明，Cur、CB和FE在Caco-2细胞中的摄取在一定浓度条件下均具有显著的时间和浓度依赖性。给药浓度为50μM，摄取时间为2h时，Caco-2细胞对Cur、CB和FE的摄取量分别为1.60±0.15nmol/mg protein、4.65±0.23nmol/mg protein、6.64±0.27nmol/mg protein;②吸收转运的结果表明，Cur、CB和FE在Caco-2单层细胞模型中的双向转运量均随时间的延长呈升高趋势，具有显著的时间依赖性。AP→BL的表观渗透系数数据表明，相同浓度(25μM)时，CB（3.18±0.31×10-6cm/s）和FE(5.28±0.83×10-6cm/s)在Caco-2细胞单层模型中的吸收转运都明显大于Cur（1.13±0.11×10-6cm/s）;③双向转运的Papp数据表明，三个化合物的ER值均在1.0-1.5范围内，提示三者的肠道转运均没有明显的主动外排现象。④CB和FE的转运量具有明显的浓度依赖性，表明这两者的转运机制主要为被动转运。
　　结论:综上所述，CB和FE在Caco-2细胞单层模型中的肠道通透性均较Cur本身具有明显的提高，故这两者在体内可能表现出更高的生物利用度，在临床用药和食品保健品方面表现出更高的应用潜力。

目录

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论文说明

致谢

摘要

缩略词简表(Abbreviations)

第一章 绪论

1．1 引言

1．2 姜黄素的研究进展

1．2．1 姜黄素的理化性质

1．2．2 姜黄素的药理活性

1．2．3 姜黄素的药代动力学

1．3 口服药物吸收的概况

1．3．1 口服药物的吸收

1．3．2 影响口服药物吸收的因素

1．4 Caco-2细胞模型法的概况和研究进展

1．4．2 Caco-2细胞单层模型研究体外药物转运方式的应用

1．4．5 Caco-2细胞单层模型研究药物剂型和辅料对药物吸收的作用

1．5 研究目的及意义

第二章 姜黄素及其类似物HPLC分析方法的建立

2．1 实验材料

2．1．1 主要仪器

2．1．2 主要材料

2．2 实验方法

2．2．1 液相条件

2．2．2 标准溶液的配制

2．2．3 样品处理

2．2．6 线性相关性分析

2．2．7 精密度分析

2．2．8 准确度分析

2．3 结果与讨论

2．3．1 Cur、CB和FE的液相色谱图

2．3．2 Cur、CB和FE在HBSS中的稳定性考察

2．3．3 系统适应性分析

2．3．4 线性相关性分析

2．3．5 精密度分析

2．3．6 准确度分析

本章小结

第三章 Caco-2细胞的培养及药物毒性考察

3．1 实验材料

3．1．1 细胞系

3．1．2 主要仪器

3．1．3 主要试剂

3．2 实验方法

3．2．1 细胞的复苏

3．2．2 细胞的培养及传代

3．2．3 Cur、CB和FE对Caco-2细胞毒性的考察

3．3 结果与讨论

本章小结

第四章 Caco-2细胞对Cur、CB和FE的摄取情况研究

4．1 实验材料

4．1．1 细胞系

4．1．2 主要仪器

4．1．3 主要试剂

4．2 实验方法

4．2．1 样品的配制

4．2．2 Caco-2细胞的培养

4．2．3 细胞对药物的摄取

4．2．4 药物定量分析

4．2．5 蛋白含量的测定

4．3 结果与讨论

4．3．1 蛋白含量标曲的测定

4．3．2 药物的摄取动力学考察

4．3．3 浓度对摄取的影响

本章小结

第五章 Caco-2细胞模型的建立及评价

5．1 实验材料

5．1．1 细胞系

5．1．2 主要仪器

5．1．3 主要试剂

5．2 实验方法

5．2．1 细胞单层模型的建立

5．2．2 Caco-2单层细胞模型的评价

5．3 结果与讨论

5．3．1 细胞单层的完整性评价

5．3．2 荧光黄跨膜转运实验

本章小结

第六章 Cur、CB和FE各自在Caco-2细胞模型中的转运研究

6．1 实验材料

6．1．1 细胞系

6．1．2 主要仪器

6．1．3 主要试剂

6．2 实验方法

6．2．1 样品的配制

6．2．2 细胞单层模型的建立

6．2．4 Papp值及ER值的计算

6．2．5 统计学方法

6．3 结果

6．3．1 时间对Cur、CB和FE在Caco-2单层模型中转运的影响

6．3．2 浓度对CB和FE在Caco-2单层模型中转运的影响

6．4 讨论

本章小结

总结与展望

参考文献

硕士期间发表的论文和专利