二维HPLC-QTOF-MS联用分析头孢菌素类药品中的杂质

摘要

调查显示头孢曲松的过敏反应率在头孢菌素类药物中居于首位，选取头孢曲松作为研究对象，采用液质联用技术探索有关物质检测方法，以达到有效控制药品质量的效果，弄清杂质产生的机制，为该类药物生产工艺的改进和药品质量提高提供参考依据，最终达到保障患者用药安全的目的。本课题主要研究内容如下:
　　(1)利用液质联用技术开发有关物质检测新方法，通过破坏试验分离出聚合物，并通过一级、二级质谱对头孢曲松的11种可能的杂质进行结构解析，分析杂质产生的途径。
　　(2)对拟定的有关物质检测方法进行方法学验证，各峰之间分离度大于1.0，检测限为0.02μg·ml-1，回收率为99.4％，RSD=1.2％，结果表明该HPLC方法具有灵敏度高、准确度好，重现性好等特点，满足检测要求。将优化后的有关物质方法与现有药典方法检测结果进行比较，发现该HPLC方法测定有关物质结果与BP方法测定结果基本一致，且高于Ch.P方法测定结果，说明该HPLC方法与BP方法检测效果相同，且比现有Ch.P有关物质方法更能有效控制头孢曲松中的有关物质。
　　(3)以Xtimate SEC-120色谱柱为基础开发凝胶色谱方法，与反相HPLC方法联用建立二维液相色谱串联质谱系统，对凝胶色谱中的聚合物峰逐一分析，发现凝胶色谱中的聚合物峰为混合物峰。根据质谱图，结合所建立的头孢曲松杂质谱确定聚合物杂质出峰位置，找到与高分子杂质总量有关的聚合物指针物质。
　　(4)按Ch.P中收载方法采用凝胶排阻色谱法对青霉素类抗生素-阿莫西林聚合物定量，实验发现以凝胶色谱法检测样品时辅料对测定结果有影响，因此采用有关物质方法对样品中的聚合物进行定性定量。在不改变药典收载的色谱条件的情况下，利用二维柱切换除盐技术对阿莫西林系统适用性溶液与阿莫西林颗粒中的二聚物进行了确认。

目录

论文说明

声明

摘要

缩略词表

1．1．1 头孢菌素类抗生素概述

1．1．2 聚合物杂质简介

1．1．3 高分子杂质的聚合特性

1．2 现代色谱技术分析抗生素中的聚合物

1．2．1 凝胶色谱法(GFC)

1．2．2 高效液相色谱法(HPLC)

1．2．3 离子交换色谱法(IEC)

1．2．4 毛细管电泳法(CE)

1．2．5 基质辅助激光解离法(MALDI)

1．2．6 液质联用(LC-MS)

1．3．1 二维液相色谱介绍

1．3．2 二维柱切换技术在分析聚合物中的应用

1．4 本课题的研究意义和主要内容

第二章 HPLC-QTOF-MS分析头孢曲松钠中的杂质

2．1 引言

2．2 仪器与试药

2．3 方法和结果

2．3．1 液相／质谱条件

2．3．2 测试用溶液

2．4 讨论

2．4．1 液相色谱条件的选择

2．4．2 质谱条件的选择

2．4．3 杂质结构解析

2．4．4 头孢曲松降解产物的产生机制

2．5 结论

第三章 HPLC梯度洗脱法测定头孢曲松钠有关物质

3．1 前言

3．2 仪器与试药

3．3 方法和结果

3．3．1 液相条件

3．3．2 对照溶液制备

3．3．3 专属性试验

3．3．4 检测限与定量限

3．3．5 线性关系与杂质C的校正因子

3．3．6 准确度试验

3．3．7 精密度试验

3．3．8 重复性实验

3．3．9 稳定性试验

3．3．10 样品测定

3．4 Ch．P2015与BP2016方法样品测定

3．4．1 仪器与试药

3．4．2 色谱条件

3．4．3 溶液配制

3．4．4 Ch．P2015、BP2016与拟定的HPLC方法比较

3．5 结论

第四章 二维液相质联用技术分析头孢曲松钠中聚合物杂质

4．1 引言

4．2 实验条件

4．2．1 实验仪器

4．2．2 试剂

4．2．3 液相色谱条件

4．3 测试溶液的制备

4．4 阀切换时间的确定

4．5 主要聚合物杂质分析

4．6 讨论

4．6．1 凝胶色谱流动相的选择

4．6．2 凝胶色谱流速的选择

4．6．3 凝胶色谱检测波长的选择

4．6．4 聚合物杂质定量

4．7 结论

第五章 二维液相柱切换分析阿莫西林颗粒中的聚合物

5．1 引言

5．2 TSK凝胶色谱法准确性评估

5．2．1 仪器与试药

5．2．2 TSK凝胶色谱法色谱条件

5．2．3 TSK凝胶色谱法试验结果与讨论

5．3 聚合物测定方法拟定

5．3．1 液相条件

5．3．2 测试用溶液

5．3．3 结果分析

5．4．1 仪器与试药

5．4．2 液相／质谱条件

5．4．3 阿莫西林系统适用性对照品中聚合物的定性研究

5．4．4 阿莫西林颗粒中聚合物的定性研究

5．5 聚合物定量

5．6 结论

第六章 结论与展望

参考文献

致谢

作者简历及在学期间所取得的科研成果