Bax基因重组腺病毒表达载体的构建及其对包装细胞HEK293的毒性作用

摘要

我们以复制缺陷性腺病毒为基因转移载体,以人类巨细胞病毒早期启动子为真核基因表达启动子,以Baxα基因为治疗基因,构建Baxα-pShuttle-Adeno重组腺病毒表达载体,并且证明其具有较高的目的基因转录和表达活性,同时发现由于重组病毒载体Baxα的表达先于病毒本身复制和包装的发生,以及Bax蛋白对于包装细胞HEK293的毒性作用,导致包装细胞的死亡,而病毒本身尚未完成复制和包装,致使病毒扩增受阻,不能达到基因治疗所需的病毒浓度.这提示我们在将来的实验中可以通过以可控的启动子代替CMV启动子,使含Bax α基因的重组腺病毒在包装细胞HEK293细胞中不表达或低表达,避免Bax 蛋白对于HEK293细胞的致死性毒性,使重组体得以包装和扩增,从而得到足够的病毒量进行胶质瘤的基因治疗.结论本实验中构建的Bax α-pShuttle-Adeno重组腺病毒表达载体和LacZ-pShuttle-Adeno重组腺病毒表达载体均能有效表达具有生物学活性的基因编码蛋白.且其目的基因表达过程及LacZ基因表达产物β半乳糖苷酶蛋白不对包装细胞HEK293产生明显的细胞活性影响.Bax蛋白由于其促细胞凋亡作用,在HEK293中表达后促使细胞死亡,而且目的基因表达先于病毒复制,因而没有有效的重组腺病毒完整颗粒的释放,不能感染周围正常的HEK293细胞,使通过HEK293细胞包装完整的Bax α-pShuttle-Adeno重组腺病毒并扩增的途径受阻,不能产生足够的腺病毒量进行针对胶质瘤的基因治疗.

目录

前言

实验材料和仪器

实验方法

结果

讨论

参考文献

综述

参考文献

致谢