胚胎干细胞分化神经细胞特性及分化机制的研究

摘要

为了探讨小鼠胚胎干细胞分化神经细胞的功能特性,及其分化过程中N-甲基-D-天冬氨酸(N-methyl-D-aspartate,NMDA)受体的表达情况,我们利用全反式维甲酸(RA)诱导胚胎干细胞拟胚体定向分化为神经细胞,用摄像相差显微镜观察分化神经细胞的形态,用免疫细胞化学方法鉴定分化神经细胞表达特异性抗原,用逆转录—聚合酶链反应(RT-PCR)检测分化神经细胞Calbindin D28K和NMDA受体(NR)亚型mRNA的表达情况,用荧光共聚焦显微镜检测分化神经细胞在NMDA刺激下胞内游离Ca<'2+>浓度的变化.为了进一步认识胚胎干细胞自我更新机制、探讨RA诱导胚胎干细胞分化神经细胞的机制,我们研究了与干细胞自我更新、增殖与分化有关的信号转导机制方面的科研文献,对干细胞信号转导研究的最新进展作了综述.

目录

第一章概论

第一节干细胞研究概述

1.成体干细胞

2.成体干细胞的生物学特点

3.脐血干细胞

4.骨髓基质干细胞与骨髓间充质干细胞

5.脂肪间充质干细胞

6.皮肤干细胞

7.造血干细胞

8.成体干细胞组织工程

第二节胚胎干细胞

1.胚胎发育与胚胎干细胞研究简述

2.胚胎干细胞的研究历史

3.ES细胞的特性

4.胚胎干细胞建系

5.ES细胞分化各种成体细胞的特性

6.ES细胞的应用前景

第三节小鼠胚胎干细胞定向诱导分化神经细胞

1.ES细胞的培养和分化

2.ES细胞向神经细胞定向诱导分化

3.无血清条件培养ES细胞定向诱导分化神经细胞

本课题的研究目的和意义

第二章小鼠胚胎干细胞建系及其特性的研究

第一节前言

第二节材料和方法

1.材料

2.试剂配制

3.仪器

4.MEF细胞的原代分离和培养

5.小鼠ES细胞的分离和培养

6.小鼠ES细胞的鉴定

第三节实验结果

1.两种小鼠得胚率、贴壁比率

2.小鼠胚胎分离和贴壁过程

第四节分析与讨论

1.饲养层细胞对胚胎贴壁和增殖的影响

2.种系和季节对得胚率和胚胎贴壁增殖率的影响

3.获取ICM方法、消化液浓度和作用时间的选择

第三章胚胎干细胞定向诱导分化神经细胞及其特性的研究

第一节前言

第二节ES细胞诱导分化神经细胞

1.材料

2.仪器

3.方法

第三节实验结果

1.胚胎干细胞、拟胚体、分化后免疫细胞化学检测

2.ES细胞分化为神经样细胞的比率

3.分化后时间序列上神经样细胞NMDA受体亚型表达的检测

4.分化神经细胞Calbindin D28、NMDA受体亚型表达的检测

5.分化神经细胞NMDA受体的活性的检测

第四节分析与讨论

第四章胚胎干细胞分化神经细胞信号转导机制的研究

第一节维持ES细胞不分化状态的机制

1.维持ES细胞不分化的因素

2.维持ES细胞不分化的信号转导机制

第二节RA诱导ES细胞分化神经细胞的机制

1.RA受体

2.RA信号转导

3.讨论

第五章总结与展望

第一节研究工作总结

第二节展望

相关论文发表情况

参考文献

致谢