体外培养胚胎干细胞分化为心肌细胞特性的初步研究

摘要

目的了解干细胞在实验条件下分化发育为心肌细胞的特征表达与培养时间的关系。方法收集体外培养条件下第2、4、6、8、10、12、14、16、18和20天的胚胎干细胞，采用RT-PCR方法对其中心肌细胞特异表达基因（α／β-MHC）的表达量进行检测，并通过管家基因（GAPDH）表达量作为内对照；另外收集第0、3、5、10天培养的干细胞，检测3种管家基因（GAPDH、HGPRT、β-tublin）表达的稳定性。结果胚胎干细胞在体外特定培养条件下，第6天起α／βMHC出现，且表达量随培养时间延长逐渐增加，至14天时表达量最高，其后随着培养时间延长，表达量保持稳定；不同管家基因表达量随培养时间的变化，稳定性相差较大，其中GAPDH基因表达的波动相对稳定。结论EST实验体系分化抑制实验的周期设计为10-14天较为合理，GAPDH适合用于作为目的基因表达量检测的内对照。