CYP3A5基因的遗传多态性对肝移植受体术后免疫抑制剂FK506用药个体间差异的作用研究

摘要

本研究通过对供受体的CYP3A5基因进行多态性分析，旨在探讨CYP3A5基因的遗传多态性与肝移植术后免疫抑制剂FK506用药的个体间差异是否存在相关性，并且评价供体CYP3A5基因与受体CYP3A5基因的遗传多态性对这种差异所分别产生的影响。从而为指导肝移植术后免疫抑制剂个体化应用寻求可靠的参考指标。 研究方法：选择2004年7月至2005年3月在我院接受肝移植手术并且术后采用FK506、骁悉(MMF)和激素三联用药为免疫抑制方案的53例患者作为研究对象。在术后第1、2周及1月三个时间点记录FK506的服药剂量及测定全血药物谷浓度。 取患者外周抗凝血分离单个核细胞并提取受体基因组DNA，PCR扩增CYP3A5*3基因，采用限制性片断长度多态性(RFLP)方法和DNA直接测序法分别检测判定受体CYP3A5*3基因的单核苷酸多态性。根据不同的基因型将患者分成两组：表达组(*1/*1和*1/*3)和非表达组(*3/*3)。比较受体CYP3A5*3基因的多态性与FK506用药剂量及血药谷浓度/剂量比值(C/D)的相关性。 取供体脾脏或外周抗凝提取供体基因组DNA，相同的方法检测供体CYP3A5*3基因的单核苷酸多态性。根据不同的基因型将患者分成两组：表达组(*1/*1和*1/*3)和非表达组(*3/*3)。比较供体CYP3A5*3基因的多态性与FK506用药剂量及血药谷浓度/剂量比值(C/D)的相关性。 结合供、受体的基因型，根据排列组合重新分组，进一步分析供、受体CYP3A5*3基因的多态性对FK506个体间用药差异分别产生的影响。 浙江大学医学院附属第一医院实验所得数据的统计学处理用SPSS12.0统计软件完成，组间比较采用非参数统计法分析。两组之间的FK506浓度/剂量比值的比较采用Mann-WhitneyU法检验，p＜0.05为差异有显著性。 研究结果：53例患者平均年龄45±9岁(29～75岁)，平均体重60.4±10.3kg(40～85kg)。其中有6例患者CYP3A5基因型为野生型纯合子(*1/*1，11.3％)，20例为突变型纯合子(*3/*3，37.8％)，27例为突变型杂合子(*1/*3，50.9％)。对应供体的基因型出现频率分别为：5(9.4％)，23(43.4％)，25(47.2％)。 为控制肝移植术后一月内的FK506全血谷浓度在7-10ng/ml，53例患者在术后1月口服FK506的需药量为每天0.022mg/kg至0.222mg/kg不等，平均为(0.097±0.051)mg/kg。口服用药量最大相差近10倍。 按照供体CYP3A5基因型分组，在术后第2周和1月*1/*1(*1/*3)组的C/D比值明显低于*3/*3组(p＜0.05)，分别为(100.99±55.71vs.139.83±70.3，p=0.036；100.13±64.27vs.141.47±778.92，p=0.021)，而在第1周两组之间差异没有显著性(106.32±46.75vs.139.16±70.01，p=0.146)；根据受体自身CYP3A5基因型分组，*1/*1(*1/*3)组的C/D比值在术后第1周、2周和1月均低于*3/*3组，分别为(112.85±52.10vs.133.31±70.03；109.12±55.19vs.132.25±77.56；112.70±74.43vs.126.93±72.28)，但是差异没有显著性(p＞0.05)。 结合供、受体CYP3A5基因型进一步分析，结果显示：供受体同为表达型(19例)与同为非表达型(9例)相比，前者C/D比值在术后第2周和1月仍显著低于后者，p＜0.05，且两者之间的差异更大，说明消除了因供受体基因型交叉的影响，CYP3A5基因型对FK506代谢个体差异的作用更加明显。当供体为非表达型时，表达型受体组(14例)的C/D比值低于非表达型受体组(9例)；当供体为表达型时，表达型受体组的C/D比值与非表达型受体组几乎相近；而无论当受体为表达型或非表达型，表达型供体组的C/D比值均低于非表达型供体组。提示受体基因型对FK506的个体差异的影响似乎被供体基因型的影响所掩盖。 研究结论： 1.肝移植术后要维持一定的血药浓度，FK506口服需药剂量在个体之间存在极大差异。 2.个体之间FK506口服需药量的这种差异与其代谢酶CYP3A5的遗传多态性密切相关。 3.供体CYP3A5*3基因的SNP较受体对这种差异的影响更大。检测供体的CYP3A5*3基因多态性对预测个体的FK506给药剂量有参考意义。 ·

目录

前言

材料与方法

结果

讨论

结论

参考文献

综述 细胞色素酶CYP3A的研究进展

附：发表的文章

致谢